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研究背景乳腺癌是一种常见的恶性肿瘤,近几年有研究指出孤儿受体家族中的肝X受体α(LXRα)与乳腺癌的发生有着密切的关系,其中肝X受体激动剂TO901317尤其对LXRα具有高亲和力,可抑制多种肿瘤细胞包括乳腺癌的增殖。最近有文献进一步指出TO901317还能诱导前列腺癌和黑色素瘤细胞凋亡。目的研究肝X受体激动剂TO901317对人乳腺癌细胞凋亡的影响以及对细胞内LXRα、TTP和NF-κB p65等表达的作用,为乳腺癌的分子靶向治疗提供新的思路。方法1.使用不同浓度(0μM,10μM,20μM,40μM)TO901317处理MCF-7和MDA-MB-231人乳腺癌细胞不同时间(0h,12h,24h,48h),用MTT法观察细胞的活性。2.用流式细胞术以及Hoechst染色检测不同浓度(0μM,10μM,20μM,40μM)TO901317处理MCF-7和MDA-MB-231细胞不同时间(0h,12h,24h,48h)后细胞凋亡的表现。3.RT-q PCR检测TO901317处理MCF-7和MDA-MB-231细胞的量效组和时效组中LXRα和Bcl-2 m RNA的改变;Western blot检测LXRα和细胞凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、Caspase 3和Cleaved-caspase3等表达的差异。4.通过生物信息学软件Interactome 3D和STRING,在线预测了LXRα、TTP和NF-κB p65三者之间的关系。5.RT-PCR检测TO901317处理MCF-7细胞的量效组和时效组中TTP和NF-κB p65 m RNA表达的改变。结果随着TO901317处理浓度的增加和处理时间的延长,对细胞的活性抑制作用逐渐增强,凋亡现象逐渐明显。当细胞处理24h,浓度在20μM时,对细胞的活性抑制约为50%,且伴随明显的细胞凋亡形态,因此,TO901317量效组采纳24h作为处理时间,时效组采用20μM作为细胞处理浓度。与此同时,RT-q PCR检测发现,TO901317可上调LXRαm RNA水平,下调Bcl-2 m RNA表达。Western blot检测除有上述一致的趋势外,还进一步发现TO901317可促使凋亡蛋白Bax、Cleaved-caspase 3表达增多,进一步证实TO901317促进两种细胞凋亡。通过生物信息学在线预测结果显示,LXRα、TTP和NF-κB p65三者之间可能存有直接或间接的相互作用。RT-PCR检测发现TO901317可上调TTP m RNA表达,并下调NF-κB p65 m RNA水平。结论1.TO901317能够促使MCF-7和MDA-MB-231乳腺癌细胞凋亡;2.TO901317促使乳腺癌细胞凋亡的机制与细胞中LXRα/TTP/NF-κB p65通路相关。