抗ω-芋螺毒素MⅦA单克隆抗体的制备与鉴定

来源 :福建农林大学 | 被引量 : 1次 | 上传用户:xuxiaohua
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芋螺毒素(Conotoxin,CTX)是芋螺(Conesnails)分泌的用于捕食和防御的一种具有生物活性的小分子多肽类神经毒素,一般含有10~30个氨基酸,大多富含二硫键,靶定神经系统的离子通道和受体,人和动物被叮咬后一般会出现麻痹、抽搐、惊厥甚至死亡。ω-芋螺毒素MⅦA(ω-CTXMⅦA)含有25个氨基酸残基,是特异的和可逆的N-型电压敏感性钙离子通道的阻断剂,可当做镇痛剂治疗剧烈的和慢性的疼痛。目前还没有基于单克隆抗体的ω-CTXMⅦA的免疫检测方法。本研究制备了抗ω-CTXMⅦA的单克隆抗体,为建立ω-CTXMⅦA的免疫检测方法奠定了基础,在神经系统的钙离子通道研究中也具有潜在的应用价值。在本研究中,GST-CTX融合蛋白作为免疫抗原免疫BALB/c小鼠,Trx-CTX融合蛋白作为检测抗原包被酶标板,检测和筛选抗ω-CTXMⅦA的抗体。当抗血清效价较高时取小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,制备杂交瘤细胞。两次细胞融合实验的融合率分别为99.27%和100%,阳性率分别为2.52%和5.03%。用有限稀释法对筛选到的阳性孔进行克隆化,得到了6株阳性杂交瘤细胞株,分别命名为9E4、7G10-D9、7G10-C7、4A12、5H10和5G2。对筛选到的6株阳性杂交瘤细胞株进行效价和稳定性检测,最后得到了一株稳定分泌ω-CTXMⅦA单克隆抗体的杂交瘤细胞株,即4A12。该杂交瘤细胞有102±2条染色体,分泌IgM类单克隆抗体。制备的腹水效价可达到1:128000,抗体亲和力为1.26×108L/mol,可特异性地与ω-CTXMⅦA发生结合反应。
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