禽流感病毒H9N2亚型对红细胞Toll样受体表达的影响

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红细胞是鸡体内最丰富的血细胞亚群,自从红细胞免疫的概念被提出后,证明红细胞可表达免疫相关因子。Toll样受体在天然免疫防御病原体感染方面起重要作用,并可介导获得性免疫。目前国内外对流感病毒的研究多集中在病原的分离鉴定、流行病学调查和重组疫苗研究等方面,而其免疫机制多集中在哺乳动物和体外易感细胞的培养,鸡红细胞免疫在流感病毒感染中的作用缺乏系统的研究。为了解鸡红细胞在抗禽流感病毒感染方面的作用,及红细胞免疫过程中天然免疫相关的Toll样受体基因具体变化规律。本试验通过普通RT-PCR证明Toll样受体在红细胞中的表达,分别通过体外红细胞与禽流感病毒H9N2亚型在0、2、6、10 h内互作和体内H9N2感染3、7、14 d试验,体外应用间接免疫荧光和透射电镜实验观察H9N2与红细胞的互作效果,并应用qRT-PCR(quantitative Real-time PCR)测定体内外TLR1、TLR2、TLR3、TLR4、TLR5、TLR6、TLR7、TLR15、TLR21在不同时间点的体内与体外表达量的变化,探究H9N2对红细胞免疫系统中Toll样受体表达量的影响。结果表明:(1)红细胞与H9N2病毒存在粘附作用;(2)体外H9N2病毒感染红细胞后,Toll样受体的表达量在不同时间点存在差异:TLR1、TLR2、TLR4、TLR5、TLR6、TLR7、TLR15、TLR21等基因m RNA表达量均在互作2 h达到峰值且差异显著(P<0.01);TLR3m RNA表达水平都高于对照组,且在10 h达到阶段内最高峰。除TLR3外其余TLRs表达量总体趋势大多为先升高,随着时间延长而降低;(3)在体内攻毒试验中,除TLR2外,所有的TLRs均在第3天表达量达到最高(P<0.001)。TLR1、TLR3、TLR4、TLR5、TLR21等基因表达量在接种后三个时间点内持续下降;TLR2、TLR6、TLR7、TLR15基因表达量呈先下降后升高趋势,且TLR2、TLR5、TLR21在三个时间点内m RNA表达量均高于对照组。了解具体变化规律对于解析红细胞免疫在抗禽流感病毒方面具有重要作用,也为进一步探讨流感病毒对禽类免疫机制影响提供了理论依据。
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