【摘 要】
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本文探索了利用米曲霉固体发酵降解鸡腿菇渣进行再利用的可能性,并对此过程中米曲霉分泌的胞外蛋白酶进行了分离纯化和动力学特性的研究。鸡腿菇渣的降解率达58.3%,产品中氨基氮
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本文探索了利用米曲霉固体发酵降解鸡腿菇渣进行再利用的可能性,并对此过程中米曲霉分泌的胞外蛋白酶进行了分离纯化和动力学特性的研究。鸡腿菇渣的降解率达58.3%,产品中氨基氮产量达13.22mg/g,其中主要呈鲜氨基酸谷氨酸的产量达16.41mg/g。
通过硫酸铵沉淀、DEAE-Sephadex A50离子交换法和Butyl-Sepharose CL-4B疏水层析法分离纯化米曲霉胞外蛋白酶,得到纯蛋白酶。纯化后该蛋白酶的纯化倍数为67.1倍,酶活力回收率为11.3%,比活力为2274.7U/mg;经测定该蛋白酶的精确分子量为53.8kDa,等电点约为4.1~4.2。
对不同底物浓度、温度和pH下米曲霉蛋白酶水解酪蛋白产生酪氨酸的动力学特性进行研究的结果表明。在反应时间为10分钟时,最佳反应温度为50℃,最佳反应pH为9。实验表明米曲霉蛋白酶水解酪蛋白生成酪氨酸的反应符合米氏方程,根据实验数据回归得到温度为40℃时的速度方程。反应速度与氢离子浓度的关系该蛋白酶在50℃下的失活规律符合双指数模型,相对酶活力与时间的关系为在4℃-50℃的范围内,蛋白酶水解反应的活化能Ea为30.67 KJ。论文还研究了不同化学组分对蛋白酶活力的影响,发现10 mM的H<,3>BO<,3>和Mg<2+>对该蛋白酶有一定的激活作用,而EDTA、SDS、Zn<2+>、Mn<2+>和Sn<2+>对蛋白酶有明显的抑制作用,10 mM的H<,2>O<,2>对该蛋白酶的抑制作用不明显。
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