目的综合参考文献方法,复制MCD饮食诱导的小鼠非酒精性脂肪性肝炎模型及软脂酸诱导的HepG2细胞非酒精性脂肪肝模型,从体内及体外分别研究四逆散配方颗粒对非酒精性脂肪性肝炎的防治疗效及作用机制。方法1.将C57BL/6小鼠随机分为正常对照组、模型组、普罗布考组、四逆散高剂量组及四逆散低剂量组。用MCD饮食喂养并同时预防性灌服普罗布考及四逆散4周,取小鼠的血清及肝脏组织标本。检测小鼠血清中肝酶ALT、 AST的活性、血清及肝脏TG的含量；HE染色观察肝脏组织病理学改变；油红O染色观察肝脏组织脂质蓄积情况；检测小鼠肝脏SOD酶活力及GSH、 MDA含量；检测小鼠肝脏线粒体ATP酶活力、线粒体肿胀度及膜电位的变化；Elisa法检测小鼠血清中TNF-α IL-22含量；RT-PCR及Q-PCR法检测小鼠肝脏AdipoR2、PPARa、CPT-1、AOX、HO-1、REF-1mRNA表达。2.将HepG2细胞分为空白组、模型组、5%四逆散含药血清组及10%四逆散含药血清组。用软脂酸诱导HepG2细胞形成非酒精性脂肪肝模型,并同时用不同浓度含药血清进行干预24h。油红O染色观察细胞内脂滴情况；检测细胞ALT、AST的活性及TG含量；检测细胞SOD酶活力及MDA含量；Q-PCR法检测细胞AdipoR2、AMPK、PPARa、CPT-1、AOX mRNA表达。结果1.模型小鼠体重骤降,且易躁、易惹怒,喝水量增加并伴随尿量增加,大便色黑干燥,显现出中医肝火旺的症状。4周后,模型组小鼠肝脏较正常组颜色明显偏黄,但肝脏重量未见增加,且由于模型小鼠体重骤降,肝指数并未见有升高。HE染色发现模型小鼠以大泡性为主的肝脏脂肪变性,并可见大量炎性细胞的浸润,肝细胞水肿变形；油红O染色发现模型小鼠肝脏内蓄积大量大小不一脂滴；与正常对照组比较,模型小鼠血清中TG含量降低,而肝脏TG含量明显升高；ALT和AST都显著升高；血清中TNFa含量急剧增加。说明MCD饮食诱导的小鼠NASH模型复制成功。2.四逆散能改变肝脏大体标本颜色；HE染色发现四逆散高剂量组肝组织脂滴空泡较模型组显著减少,肝细胞肿胀较明显,可见少量炎性细胞浸润,而四逆散低剂量组肝组织脂滴空泡较多,炎性细胞浸润明显;油红O染色发现四逆散高剂量组肝细胞内脂滴较模型组明显较少,而普罗布考及四逆散低剂量组肝细胞内仍可见大量脂滴；与模型组比较,四逆散高剂量能升高血清TG含量,并降低肝脏TG含量；四逆散高剂量能降低小鼠ALT及AST酶水平；四逆散组能降低血清中TNFα含量,其中高剂量作用强于低剂量组。3.四逆散高低剂量组均能增加SOD活性和GSH含量,降低MDA含量；能有效降低线粒体Na+K+-ATP酶和Ca+Mg+-ATP酶活力至正常水平；四逆散低剂量可恢复线粒体对高钙浓度的敏感性,同时使线粒体对罗丹明123的摄取量显著增加；四逆散高低剂量组均能有效降低小鼠血清TNFα含量,升高IL-22含量,但升高IL-22的作用并不明显；能上调肝脏的AdipoR2、 PPARα、CPT-1. AOX mRNA表达,其中四逆散高剂量组作用明显；能上调HO-1、REF-1mRNA的表达水平。4.软脂酸诱导HepG2细胞24h后,油红O染色显示细胞内有大小不等脂滴存在,表明体外非酒精性脂肪肝模型复制成功。5.用不同浓度的含药血清干预后发现,四逆散含药血清能减少细胞内脂滴的沉积,降低细胞TG的含量和肝酶的水平,同时能升高细胞SOD酶活力,降低MDA的含量；10%含药血清组能上调细胞AMPK、CPT-1和AOX mRNA表达,而5%含药血清组则上调细胞AdipoR2mRNA表达。结论1.采用MCD饮食诱导喂养4周,能够复制与临床病理类似的小鼠NASH模型。2.四逆散能减少肝脏脂质沉积,改善肝功能,保护肝细胞,对NASH有预防治疗作用。3.四逆散通过增强AdipoR2-α通路及其控制的脂质氧化酶,上调抗氧化基因的表达,增加肝脏脂肪酸氧化代谢和抗氧化能力,从而成为治疗NASH重要靶点。4.四逆散能抑制NASH的炎症,因此抗炎也是其作用机制之一