论文部分内容阅读
枯草芽孢杆菌HJD.A32是本课题组从山西老陈醋醋醅中筛选出一株能产广谱抑菌细菌素的菌株,本试验以它为基础,分别对菌体生物学特性以及其所产细菌素的抑菌机理进行研究。为枯草芽孢杆菌HJD.A32作为益生菌微生态制剂和生物防腐剂的开发和利用奠定理论及应用基础。主要研究结果如下:(1)采用酶学方法对不同培养方式对枯草芽孢杆菌HJD.A32产酶性能的分析,发现枯草芽孢杆菌HJD.A32具有产液化酶、糖化酶和蛋白酶的能力,固态培养产酶性能比液态培养产酶性能好,糖化酶、液化酶和蛋白酶活力分别高达1874.23U/g、4.43U/g和181.91U/g。(2)该菌株具有良好的耐受性。通过分光光度法发现该菌株对酒精、氯化钠和胆盐具有一定的耐受性,最高耐酒精、氯化钠、胆盐浓度分别为8%,8%,1%;在一定范围内对表面活性剂(SDS、LAS、AES、吐温20、吐温80)具有耐受性;对酸碱具有耐受性,最高耐受酸度为1,最高耐受pH为12;对热耐受性,经高温100℃处理5min后仍然可以生长繁殖;对模拟人工胃液和肠液具有一定的耐受性,随着培养时间的延长,可以适应人工胃液和肠液环境并生长繁殖。通过牛津杯法发现对不同种类的抗生素(氨基糖苷类、大环内酯类、四环素类、β-内酰胺类、磺胺类、喹诺酮类、酰胺醇类、咪唑类)具有较弱的耐受性。(3)以大肠杆菌和金黄色葡萄球菌为指示菌对枯草芽孢杆菌HJD.A32所产细菌素进行抑菌机理的研究。采用分光光度法研究枯草芽孢杆菌HJD.A32所产细菌素粗提液(简称细菌素A32粗提液)对指示菌生长的影响、磷含量的变化、细胞膜的渗透性;通过蒽酮法测定可溶性总糖的含量;通过观察电导率变化研究细胞膜通透性的变化;通过碱性磷酸酶含量的测定研究对细胞壁的影响;采用考马斯亮蓝法测定可溶性蛋白含量的变化;采用SDS-PAGE电泳法观察对蛋白质合成的影响。结果表明:细菌素A32粗提液能有效减缓指示菌的生长速率;破坏指示菌细胞膜和细胞壁,使细胞内容物外泄,导致可溶性蛋白、总糖含量增加,电导率增大,影响磷代谢;同时细菌素A32粗提液对细菌蛋白质的合成有一定的影响,阻碍细菌蛋白质的正常表达。