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橄榄叶为橄榄科植物橄榄的树叶,其中所含的黄酮类化合物具有多种药用和保健功效,因此橄榄叶在医药和保健食品领域具有巨大的开发和应用潜力。本论文对橄榄叶黄酮类化合物的提取工艺、分离纯化和结构分析进行了研究和探讨,主要研究内容和结果如下:
1.研究了橄榄叶黄酮类化合物的乙醇浸提法、以及超声和微波对提取过程的强化,并对提取的条件进行了优化。
(1)在乙醇浸提法中,各因素对黄酮得率影响大小的次序为:乙醇浓度>提取时间>提取液温度>提取液固比。乙醇浓度对黄酮得率有显著影响,提取时间、提取液温度对黄酮得率有一定影响,提取液固比对黄酮得率没有显著影响。最佳提取条件是:提取时间为24h,提取液温度为60℃,提取液固比为20:1,乙醇浓度为80%。
(2)在超声强化提取法中,各因素对黄酮得率影响大小的次序为:超声提取时间>超声电功率>乙醇浓度>提取液温度。超声提取时间、超声电功率对黄酮得率有高度显著影响,乙醇浓度对黄酮得率有显著影响,提取液温度对黄酮得率有一定影响。最佳提取条件是:超声提取时间为40min,超声电功率为160W,提取液温度为60℃,提取液固比为20:1,乙醇浓度为80%,超声频率为25kHz。
(3)在微波强化提取法中,各因素对黄酮得率影响大小的次序为:微波辐射功率>微波提取时间>乙醇浓度>提取液温度。微波辐射功率、微波提取时间对黄酮得率有高度显著影响,乙醇浓度对黄酮得率有显著影响,提取液温度对黄酮得率有一定影响。最佳提取条件是:微波提取时间为10min,微波辐射功率为500W,提取液温度为60℃,提取液固比为20:1,乙醇浓度为80%。
(4)比较不同的橄榄叶黄酮的提取方法,黄酮得率由高到低依次为:微波强化提取法>超声强化提取法>乙醇浸提法。黄酮的抗氧化活性由大到小依次为:BHA>BHT>微波强化提取法黄酮>超声强化提取法黄酮>乙醇浸提法黄酮。
(5)通过选择合适的提取曲线方程,分析并建立了超声强化提取过程和微波强化提取过程的主要影响因素的数学模型。
2.采用聚酰胺柱层析和制备型薄层层析对橄榄叶黄酮提取液进行分离纯化
(1)用聚酰胺柱层析法对橄榄叶黄酮提取液进行第一次分离,优化了聚酰胺柱层析的最佳条件是:原液浓度为1mg/mL,吸附流速为1mL/min,选择提取液泄漏点体积的80%为上样量,洗脱剂为50%乙醇,洗脱剂用量为200mL,洗脱流速为1mL/min。用亚油酸系统法测定了分离出来的每管样品的抗氧化活性,筛选出活性最强的样品,将其命名为A5。
(2)将样品A5再经过聚酰胺柱层析进行第二次分离,用亚油酸系统法测定了分离出来的每管样品的抗氧化活性,筛选出活性最强的样品,将其命名为B5。经过特征显色分析可知,样品B5中含有黄酮类化合物。
(3)由制备型薄层层析纯化样品B5,优化了薄层层析的最佳条件是:采用带状点样,点样宽度不超过5mm,展开剂为乙酸乙酯∶丁酮∶甲醇∶水=60∶10∶20∶10,展距为18cm。样品B5经薄层层析分离纯化后,进行显色分析得到样品C1、C2、C3。用亚油酸系统法测定了样品的抗氧化活性,筛选出活性最强的样品C3。
(4)对样品C3进行HPLC分析,结果表明:分离纯化得到的样品C3是一个纯物质,可以用于结构分析实验。
3对橄榄叶黄酮类化合物进行结构分析研究
运用UV、IR、LC.MS和<1>HNMR,<13>CNMR四种谱图分析方法对分离出来的橄榄叶黄酮样品C3进行了结构分析,确定样品C3为木犀草素。