【摘 要】
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苦参碱能抑制白血病K562细胞的增殖[1],但其作用的分子机制仍未明了,尤其是它的细胞内作用靶点。本课题拟构建小分子配体酵母三杂交系统以直接在活细胞内筛选与苦参碱有相互
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苦参碱能抑制白血病K562细胞的增殖[1],但其作用的分子机制仍未明了,尤其是它的细胞内作用靶点。本课题拟构建小分子配体酵母三杂交系统以直接在活细胞内筛选与苦参碱有相互作用的靶蛋白。该研究课题主要分为三个部分:①运用RT-PCR技术扩增糖皮质激素受体结合域片段(GR);②pGBKT7-GR重组载体的构建、转化与表达;③human erythroleukemia MATCHMAKER cDNA library质粒的准备与小分子配体对酵母细胞生长与交配的影响。成功扩增糖皮质激素受体的结合域片段并构建重组质粒pGBKT7-GR,克隆的片段经测序证实与人体糖皮质激素cDNA序列一致,重组质粒pGBKT7-GR对酵母细胞无自激活和毒性作用。在培养基中加入地塞米松-苦参碱杂合的小分子配体对酵母细胞生长和交配无影响。对人白血病MATCHMAKER cDNA文库细胞培养后抽提质粒并用酶切检测cDNA的多样性。经进一步鉴定后该系统可用于苦参碱作用靶点的活细胞筛选。
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