猫细小病毒灭活疫苗的制备及保护性研究

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猫瘟热又称猫泛白细胞减少症或猫传染性肠炎,是由猫细小病毒(FPV)引起猫的一种接触性急性传染病。临床症状为双相热型、呕吐、腹泻、严重脱水和血液白细胞显著减少,病理上为出血性肠炎,是猫科动物最重要的传染病。FPV在自然状态下可引起猫、水貂、浣熊等动物较高的发病率和死亡率,对各种野生动物和特种经济动物构成极大的威胁。本病目前尚无有效治疗方法,预防的最主要措施是注射疫苗。由于FPV仅有一个血清型,不易产生变异,因此可筛选免疫原性较强的毒株制备疫苗,通过阶段性免疫为动物群提供长期保护。本研究首先对筛选出来的FPV CC-2型毒株扩大培养,通过试验比较并确定了毒株的最佳生长条件,确定病毒的灭活条件并对灭活剂残留进行检测,实验结果显示经BPL在4℃8小时即可完全灭活,37℃水浴水解2h后BPL检测无残留。参考《兽用生物制品规程》配制了Al(OH)3胶佐剂,主要指标检验合格,与灭活病毒按1:9比例混合,检测铝离子含量为1.6~1.7mg/mL,均在规定范围内。配制的疫苗经无菌检验、支原体检验、外源病毒检验(FCV、FHV)均为阴性,没有任何污染。其中无菌检验为国家质量标准,支原体检验按国家标准需要时间长达28天,本研究采用PCR扩增技术检验,快速、敏感、特异性强,减少了检验周期,外源病毒检验技术由于目前没有国家标准,本试验依靠特异性较好的RT-PCR和PCR技术,无论技术本身还是结果的可靠性,都是值得采纳的方法。随后对实验室生产制备的疫苗进行安全性检验,分别以一次单剂量、单剂量重复和一次超剂量接种实验猫,通过临床观察、体温测定、抗体水平检测和病理学观察证明,本疫苗具有良好的安全性,同时可诱导机体产生良好抗体水平。免疫保护试验证实本疫苗的免疫效果,对实验猫正常免疫后30d进行攻毒实验,在攻毒后30d内,免疫组试验猫均健活,仅一只猫有轻微病症且最终耐过,保护率为100%;对照组死亡率为80%,经检测死亡猫为FPV阳性。
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