背景：断肢的保存方法是断肢再植成功的关键，传统的保存方法有单纯低温保存法、低温+器官液保存法、高压氧保存法及断肢暂时异位寄养保存法，以上方法都有其局限性或副损伤，因此我们研究了体外模拟体内生理环境保存断肢的方法。该方法通过在体外建立心肺系统、血滤系统模拟体内生理环境向肢体供血，以延长肢体保存时间。该方法经科技查新国内外未见报道。目的：拟通过RT-PCR及western-blot检测体外模拟体内生理环境寄养断肢是否优越于常规保存方法；通过不同温度下对断肢进行灌注找到该方法保存断肢的最适温度。方法：实验1：广西巴马小型猪，成年健康雄性6只（共24只肢体）随机分为2组：缺血组（I组）和灌注组（P组）。采用循环血液灌注模拟生理环境，分别在0,3,6,9,12小时取材，缺血组同样在上述时间点取材。采用RT-PCR及western-blot方法分别检测各组细胞凋亡蛋白和炎症因子水平。实验2：健康雄性成年巴马小型猪6只，取24个肢体随机分为4组（n=6），将肢体置于体外模拟体内生理环境寄养系统，A组于常温（26℃）下，B、C、D组分别于4、10、18℃低温下体外寄养断肢。12h后取各组肢体骨骼肌，行组织学及透射电镜观察骨骼肌结构，实时定量RT-PCR检测TNF-α及IL-1β mRNA表达水平。结果：实验1：在灌注组中，TNF-α，IL-1-β和caspase-3mRNA及蛋白表达水平在各个时间点较缺血组显著下降，且在灌注12小时后仍处于较低水平。实验2：经光、电镜观察示，10℃肌纤维形态良好，肌细胞含有大量的肌原纤维束，肌纤维排列整齐规则，肌节清晰可见。RT-PCR结果示：10℃组TNF-α、IL-1β mRNA表达水平明显降低，均低于B、C、D组。结论：通过体外模拟体内生理环境寄养断肢方法优于常规方法，其保护机制有可能通过降低炎症因子及凋亡因子释放等实现。其中温度对断肢的保存具有重要作用，其中10℃保存离断肢体可显著抑制再灌注致骨骼肌细胞损伤。该方法已在临床应用2例，并获得成功。