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凋亡(apoptosis,AP)是细胞的程序性死亡(programmedcelldeath,PCD)过程。凋亡过程中,不再需要的或受损伤组织的细胞发生程序性死亡,可以说凋亡是细胞的正常死亡,同细胞的增殖发育是相反的生理过程。动物乳腺在整个发育过程中也存在着细胞增殖与凋亡的动态平衡,乳腺细胞凋亡的研究是乳腺生物学的重要组成部分,动物乳腺细胞凋亡机理的研究对揭示乳腺发育的规律,为泌乳生物学和乳腺功能调控的深入研究提供了依据。
本试验以小鼠乳腺为材料,采用TUNEL法和毛细管电泳法系统地研究了小鼠乳腺正常发育过程中的细胞凋亡。结果表明小鼠乳腺发育不同时期细胞凋亡同结构和功能发育之间相互联系。青春期乳腺发育缓慢,结构变化较小,乳腺细胞凋亡量相对较小,其中青春期50~60d随着乳腺导管的发育,乳腺导管周围的脂肪细胞凋亡量有所增加。妊娠期乳腺导管持续发育,乳腺中主要是脂肪细胞发生凋亡,凋亡量维持在中等水平,其中妊娠末期,乳腺腺泡大量出现,脂肪细胞凋亡也随之增加。泌乳期乳腺的结构和功能最为完善,乳腺结构变化很小,细胞凋亡量维持在很低水平。退化期随着泌乳的结束,乳腺导管和腺泡结构开始瓦解,大量细胞发生凋亡,其中退化初期乳腺细胞凋亡持续增加,退化3d达到最大值,然后凋亡量逐渐降低,此时脂肪细胞数量开始增多,占据导管及腺泡细胞凋亡后的位置;退化10d后乳腺已经基本恢复到青春期状态,凋亡细胞量也随之减少。
试验中毛细管电泳检测小鼠乳腺细胞凋亡很好地验证了TUNEL法检测结果。结果显示,小鼠乳腺在青春期、妊娠期、泌乳期凋亡量都很低,退化期凋亡量显著增加,退化3d达到凋亡高峰,而后逐渐下降。试验也证明了毛细管电泳是一种方便快速、灵敏度高的细胞凋亡检测方法,有广泛的应用价值。
瘦素是一种多靶器官、功能广泛的蛋白激素,瘦素及其长型受体在乳腺脂肪垫和乳腺上皮细胞中都有表达,提示它对乳腺发育、泌乳和退化有一定的调控作用。本试验通过小鼠乳腺组织体外培养的方法,将退化1d的乳腺组织分别在含有瘦素和不含瘦素的培养基中培养,培养后的组织分别用TUNEL法检测细胞凋亡,分析瘦素对退化期乳腺细胞凋亡的作用。结果显示,不加瘦素培养的组织形态保持较好,凋亡细胞较少;加瘦素培养组织的导管和腺泡结构已经开始发生解体,组织中有较多的凋亡细胞,证明瘦素在退化期乳腺组织中可明显诱导细胞凋亡。