近年来研究发现真核生物基因组中有许多重复序列在基因的表达调控具有重要的作用。其中很大一部分是非编码序列,其对编码基因的转录、翻译和表达等过程中有着重要的调控作用。这些可动元件的活化可改变邻近基因的表达,在编码区内或旁边的新插入点能够引起突变并导致基因表达发生变化和基因组的重塑。在这些重复序列中,有一种广泛分布于基因组中的逆转座子LINE-1,目前发现其对细胞的增殖与分化以及肿瘤的发生起着非常重要的作用。LINE-1是人类基因组中的主导转座子,在正常分化的细胞中,LINE-1的启动子为高度甲基化状态,造成其沉默,但生殖细胞发育、胚胎发育的早期以及肿瘤细胞中则为激活状态。研究表明在几乎所有的肿瘤细胞中LINE-1均为激活状态,提示其激活可能涉及肿瘤发生的共同机制。所以通过LINE-1的研究对了解肿瘤发生、发展和调控的分子机理以及肿瘤药物靶标具有重要意义,同时也为开发新型的肿瘤治疗药物提供新的靶点LINE-1全长基因包括两个开放阅读框ORF1和ORF2,表达两种蛋白ORFlp和ORF2p,相对于ORF2p, ORF1p的表达大大过量。其中ORFlp具有与自身核酸结合活性,形成核酸蛋白复合物(RNP),而ORF2p具有内核酸酶及外切酶活性,与ORF1p一起执行逆转座功能,其机制为TPRT (Target-primed reverse transcription)本论文通过向细胞转染干扰载体下调LINE-1ORF1来验证以前通过基因芯片筛选出的差异表达基因,我们对显著性差异基因结构分析发现,部分基因的上游或者下游具有LINE-1高度同源的序列,提示LINE-1对其调控可能与这些序列的特征有关,另外LINE-15’UTR含有双向启动子,其激活后可生成双链RNA,继而加工生成siRNA,同时也不排除其单链转录产物加工生成siRNA的可能。基于这些因素,我们拟通过构建含有LINE-15’UTR正向和反向序列的重组表达载体,以及LINE-1ORF1干扰表达载体,转染HepG2细胞,探寻LINE-1对候选靶基因调控的机制。