【摘 要】
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目的:制备超顺磁性脂质体作为基因载体,并评估载体条件和生物安全性。优化体外转染条件,提高磁转染效率。探讨携带Survivin干扰基因的磁性脂质体对骨肉瘤MG-63细胞生物学行为的影响。方法:1.采用化学共沉淀法制备Fe_3O_4纳米粒子,将其和Lip2000制成磁性脂质体。通过琼脂糖凝胶电泳观察质粒结合能力。Zeta电位分析仪和振动样品磁强计(VSM)用于检测载体的Zeta电位和磁性。透射电子显微
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目的:制备超顺磁性脂质体作为基因载体,并评估载体条件和生物安全性。优化体外转染条件,提高磁转染效率。探讨携带Survivin干扰基因的磁性脂质体对骨肉瘤MG-63细胞生物学行为的影响。方法:1.采用化学共沉淀法制备Fe3O4纳米粒子,将其和Lip2000制成磁性脂质体。通过琼脂糖凝胶电泳观察质粒结合能力。Zeta电位分析仪和振动样品磁强计(VSM)用于检测载体的Zeta电位和磁性。透射电子显微镜(TEM)用于观察转染细胞的能力。细胞划痕法和MTT法评估磁性脂质体的细胞毒性。2.用倒置荧光显微镜,观察不同磁性场作用时间下转染人肾上皮细胞(HEK-293)后GFP绿色荧光的表达,从而优化转染条件,以及转染骨肉瘤细胞(MG-63、143b)的能力。流式技术检测转染后GFP表达强度,并评估转染效率。3.构建Survivin干扰质粒,CTL发光法、CCK8法检测磁性脂质体载干扰基因对骨肉细胞MG-63细胞活性和增值的影响;Tanswell检测对细胞迁徙的影响;PI-Hoechst试剂盒检测对MG-63细胞凋亡的影响。结果:1.凝胶电泳显示构建的所含磁性纳米粒稀释倍数为50X的磁性脂质体与质粒刚好结合。电势测定磁性脂质体的Zeta电位为27.94mV,带正电荷。磁滞回线显示磁性脂质体磁响应性良好并具有超顺磁性。透射电镜观察到磁性脂质体通过膜凹陷进入细胞,并大量的分布在胞质中。细胞划痕实验和MTT法检测结果均表明所制备的磁性脂质体没有显著性的细胞毒性。2.细胞转染实验表明,在外加磁场作用15分钟条件下,转染效率达到最高。体外条件下,通过高效的磁转染效率,携带的Survivin干扰基因对骨肉瘤MG63的增值、迁徙有明显的抑制作用,并且可促进其凋亡。结论:构建的磁性脂质体具有超顺磁性且带正电荷,能作为良好的基因载体,大大提高基因的转染效率,可以将目的基因高效的转入靶细胞,从而发挥治疗作用。本研究通过携带Survivin干扰基因体外条件下对骨肉瘤MG-63细胞表现出了良好的抑制的作用,为骨肉瘤基因治疗提供了新的方法和思路,也为其他疾病的治疗展示了一个新途径。
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