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第一部分超声辐照对SK-N-SH细胞存活率的影响目的:研究不同时间的超声辐照对SK-N-SH细胞存活率的影响,确定下一步实验所用的超声辐照参数。方法:使用不同的时间(10-100秒)对SK-N-SH细胞进行超声辐照,用MTT法检测辐照后细胞的存活率。结果:不同时间的超声辐照后,SK-N-SH细胞存活率由99%降至11%,辐照时间越长,细胞存活率越低。辐照时间≤40秒,细胞存活率>90%。结论:超声波对SK-N-SH细胞有细胞毒作用,辐照时间与细胞存活率之间呈现明显的量效关系。确定40秒为下一步实验所用超声辐照时间。第二部分超声对SK-N-SH细胞化疗敏感性的影响及其机制探讨目的:研究超声辐照对SK-N-SH细胞化疗敏感性的影响,并初步探讨其作用机制。方法:1、将SK-N-SH细胞分为实验组和对照组,实验组又分为VCR组、VCR+U组。VCR组细胞加入不同浓度的VCR ,进行超声假照。VCR+U组细胞在加入不同浓度的VCR后再接受超声辐照(频率:0.8MHz,声强:1W/cm2,时间:40s),用MTT法检测各组细胞的存活率。2、用扫描电镜观察超声辐照前后细胞结构的改变。3、用免疫组化方法检测超声辐照前后细胞P-gp表达的变化。结果:1、VCR+U组细胞存活率较VCR组明显降低。2、扫描电镜发现超声辐照后细胞膜上出现大小不一的孔,微绒毛减少或者脱落。3、超声辐照后SK-N-SH细胞P-gp的表达较对照组降低。结论:1、超声可以增强化疗药物长春新碱对SK-N-SH细胞的细胞毒作用。2、超声辐照使SK-N-SH细胞膜结构发生损害。3、超声辐照可以使SK-N-SH细胞P-gp的表达降低,超声可以逆转肿瘤细胞的MDR。结论1、实验对SK-N-SH细胞采用不同时间进行超声辐照,结果显示超声波能够降低SK-N-SH细胞存活率,辐照时间越长,细胞存活率越低,辐照时间与细胞存活率之间呈现明显的量效关系,表明超声波对SK-N-SH细胞有细胞毒作用。2、超声辐照时间≤40秒,细胞存活率>90%,该剂量的超声辐照不会造成SK-N-SH细胞急性死亡,确定40秒为第二部分实验所用辐照时间参数。3、超声可以增强化疗药物长春新碱对SK-N-SH细胞的细胞毒作用。该作用在长春新碱浓度较低时更明显。4、超声增强SK-N-SH细胞化疗敏感性的机制:⑴超声辐照使SK-N-SH细胞膜发生损害,表现为①细胞膜上出现大小不一的孔,细胞膜的通透性增高。②细胞微绒毛减少,脱落。⑵超声辐照使SK-N-SH细胞P-gp的表达降低,表明超声波可以逆转肿瘤细胞的MDR。