PCV2、PPV、PRV、PRRSV和CSFV复合PCR检测技术的建立和初步应用

来源 :青岛农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:chinajolly66
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
猪繁殖障碍病在国内外都有严重发生,已成为大中型猪场最重要的疫病之一,并且呈全球性分布。我国当前以猪圆环病毒2型感染、猪细小病毒病、猪伪狂犬病、猪繁殖与呼吸综合征、猪瘟造成的猪繁殖障碍最为普遍和严重,特别是这几种病原常混合感染,可以引起70%以上的初产母猪发生流产、产死胎、弱仔,给养猪业造成巨大的经济损失。   本研究针对猪圆环病毒2型(PCV2)、猪细小病毒(PPV)、猪伪狂犬病病毒(PRV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)和猪瘟病毒(CSFV)5种病原,建立复合PCR检测技术,并用该法对山东省胶东地区的猪场进行检测,从而了解该地区猪繁殖障碍病的发病情况,为猪场制定合理的免疫程序提供参考。   根据Genbank上PCV2、PPV、PRV、PRRSV和CSFV的已知序列,分别设计并合成了5对特异性扩增引物,建立PCV2、PPV、PRV、PRRSV和CSFV单项PCR检测方法,分别扩增出预期的466 bp、759 bp、349 bp、202 bp和707bp片段。对单项PCR反应条件(引物浓度、dNTP浓度、TaqDNA聚合酶浓度、退火温度和PCR反应程序)进行优化,筛选出最佳反应条件。   在优化单项PCR反应条件基础上,建立了PCV2-PPV-PRV-PRRSV-CSFV复合PCR检测方法,并对其特异性、敏感性和重复性进行了测定。结果表明:只有特异性引物与其特异性模板能扩增出预期大小的条带,与其它模扳没有任何扩增产物,表明该法特异性好;最低能检测到184pg/L的PCV2、248pg/L的PPV、5.3ng/L的PRV、25.6ng/L的PRRSV、15.28ng/L的CSFV的核酸模板,表明该法具有较高的敏感性;重复检测3次,其结果均一致,表明重复性好。   采用建立的PCV2-PPV-PRV-PRRSV-CSFV复合PCR检测方法,对山东省胶东地区送检的32份临床疑似病料进行了PCR检测,结果表明:32份样品中,PCV2、PPV、PRV、PRRSV和CSFV感染的阳性率分别为25.00%、0%、34.38%、71.88%和3.13%;共检出25份阳性病料,阳性率为78.13%,其中PRV-PRRSV双重感染的比例为31.25%,PCV2-PRV-PRRSV三种病原体混合感染的比例为25.00%。用单项PCR检测作对照,结果两者符合率为100%,表明该复合PCR检测方法具有较高的敏感性,可以进行临床猪圆环病毒2型感染、猪细小病毒病、猪伪狂犬病、猪繁殖与呼吸综合征和猪瘟的病原学快速诊断。
其他文献
副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis,Hps)是猪Glassers病的病原菌,临床上以纤维蛋白性多发性浆膜炎、关节炎和脑膜炎为特征。Hps是属于巴斯德菌科嗜血杆菌属的一种不运动、NAD依
重庆要与成都共建西部金融中心、打造内陆国际金融中心,金融人才是第一资源.金融产业发展日新月异,普惠金融、农村金融、私募基金、地方金融机构和金融监管等发展在一定程度
在“大众创业、万众创新”的时代背景下,大学生创业园应运而生.它集大学生创业实践、创业孵化、创业培训、创业服务功能于一体,成为大学生创业路上提供空间支持和服务保障的
当前,我国经济发展稳中向好,低碳经济行业也积极推动了我国社会经济发展,但由于当前国家经济新政策的实行以及目前世界经济增长乏力,不少投资者对经济的担忧不断增大,低碳经
新时期背景下,人工智能被广泛地应用于各个领域.金融领域中应用人工智能,有利于促进金融行业全新发展和创新.当前,人工智能被广泛地应用在金融领域的保险、资产配置、大数据
中小企业是促进我国经济高质量发展的重要基石,也是疫情下完成“六稳”“六保”工作的有力抓手.从全球范围来看,破解中小企业“融资难、融资贵”难题是所有国家经济发展过程
中小企业是国民经济的重要组成部分,但中小企业普遍存在融资难的问题.本文从中小企业融资担保发展中存在的障碍入手,提出相应的建议,旨在构建一个完整的融资担保体系,加大对
1、参考Genbank上的IBV S1基因序列,自行设计合成了一对跨幅约0.6kb的引物。利用RT-PCR对9株IBV分离株RNA进行RT-PCR扩增,将其克隆到(pMD18-I)Vecter进行序列测定。用分子生物
本文将对优化农村经济结构的主要意义加以阐述,同时指出此项工作得以顺利开展应遵循的相关原则,并且分析当前此项工作存在的各种问题,进而针对性地提出相应的合理优化对策,以
Target tracking control for wheeled mobile robot (WMR) need resolve the problems of kinematics model and tracking algorithm.High-order sliding mode control is a