【摘 要】
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本文从自然界筛选高产β-葡聚糖酶的菌种,对发酵培养基、发酵条件进行研究,菌株进行了鉴定,并通过紫外线对菌株进行诱变,进一步提高菌株的产酶性能,最后利用二步发酵法研究了
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本文从自然界筛选高产β-葡聚糖酶的菌种,对发酵培养基、发酵条件进行研究,菌株进行了鉴定,并通过紫外线对菌株进行诱变,进一步提高菌株的产酶性能,最后利用二步发酵法研究了发酵工艺对菌株产酶的影响。1.根据产β-葡聚糖酶菌种的特性,设计了菌种富集培养基、初筛培养基和筛选路线。在不同地方采集土壤样品,筛选到63株产酶菌株,其中透明圈直径与菌落直径之比较大的有11株,经过复筛及摇床发酵试验,确定了一株酶活为16.34IU/mL菌株为研究对象,记为H325。2.对菌株H325的发酵培养基进行了优化:通过单因素试验,研究了不同碳源、不同氮源、无机盐对菌株H325产酶的影响,并在单因素试验的基础上,利用正交试验设计优化确定了最佳产酶培养基的配方:燕麦粉1.5g/100mL,玉米浆2.5g/100mL,NH4NO3 0.2g/100mL,MgSO40.02g/100mL,FeSO4·7H2O 0.01g/100mL,CaCO30.5g/100mL,Na2HPO40.05g/100mL。在最佳产酶培养基上,菌株H325产酶活性达53.85IU/mL,比初始设计培养基提高了229.56%。3.对发酵条件进行优化,确定了菌株H325产酶的最佳发酵条件为:培养基初始pH6.0,培养温度30℃,接种量0.5mL(孢子悬液浓度为1.0×106个/mL),培养基装量50mL/250mL,培养时间60h,吐温-80浓度0.1mL/100mL,β-葡聚糖0.05g/100mL。在上述最适培养条件和改良产酶培养基下,菌株H325产酶活性为82.92IU/mL,比初始产酶培养基和培养条件下提高了450.31%。4.对菌株H325的菌落、菌丝及孢子形态特征的观察,将其初步确定为黑曲霉属(Aspergillusniger H325)。5.利用紫外线对野生菌株H325进行诱变,利用刚果红营养鉴定平板进行初步筛选,再通过摇床发酵培养,最终得到一株正向突变株H325-13,其酶活为85.38 IU/mL,比出发菌株提高2.97%。同时对该突变株的遗传稳定性进行了研究,得出突变株H325-13产酶较稳定。6.研究了发酵工艺对产酶的影响,结果表明采用两步发酵工艺进行产酶发酵酶活达94.28IU/mL,比一步发酵高出了11.36个酶活单位;同时其发酵周期也大大缩短,缩短达22h。
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