甜瓜(Cucumis melo L.)是世界上重要的园艺作物之一,香气是衡量其品质的重要指标,是吸引消费者和增强市场竞争力的重要因素之一。甜瓜香气源于某些挥发性物质,这些挥发性物质主要是酯类、醇类、醛类、萜类和挥发性酚类等。酯类挥发性成分作为甜瓜特征香气成分,多种酶参与了其代谢的调控,而醇酰基转移酶(Alcohl Acyltransferaes, AAT)是酯类合成途径中最末端的关键酶。因此,利用现代分子生物学的方法改变醇酰基转移酶的活性对甜瓜品质育种具有重要的意义。本研究首先通过RT-PCR及3′、5′RACE技术克隆到甜瓜果实AAT基因全长cDNA,并做了该基因的时空表达分析,然后构建了甜瓜果实AAT基因的正反义表达载体。以番茄自交系Pr1为材料,通过根癌农杆菌介导法将甜瓜果实反义AAT基因进行了番茄的遗传转化,得到了转基因植株。研究的主要结果如下:1.通过RT-PCR及3′、5′RACE技术克隆到甜瓜果实AAT基因。测序结果表明AAT基因全长为1386 bp,编码461个氨基酸,在GenBank中登记号为EU431334。2.通过荧光定量PCR分析得知,在甜瓜果实的不同发育时期,甜瓜花后15天之前,表达量逐渐下降,随后又逐渐升高,在成熟的果实中表达量最高。3.将克隆在pMD18-T simple (pMD18-T)载体上的甜瓜AAT基因用XbaI和SmaⅠ(SalI和BamHI)进行酶切,酶切产物经1.0%琼脂糖凝胶电泳后回收1500 bp(700bp)的片段,将该片段与经XbaI和SmaⅠ(SalI和BamHI)酶切的植物表达载体pROK3(pBI121)进行连接,这样获得了AAT基因的正义及反义表达载体。经酶切和PCR检测表明,我们成功构建了甜瓜正反义AAT基因的植物表达载体。4.本研究利用根癌农杆菌介导法将构建的反义载体pBI-MAAT基因对番茄进行了遗传转化,应用PCR技术对分化植株进行了分子鉴定,在获得的11株成苗中,共鉴定出3株转基因植株,转化效率为27.3%。