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14-3-3蛋白是一个丰富的广泛表达的蛋白家族,是一个可以自发聚集成二聚体的多功能蛋白质。14-3-3蛋白在脑组织中含量丰富,所有神经细胞的细胞液和细胞核中都有表达。正常情况下存在于胞浆内,在脑脊液中含量甚微。吉兰-巴雷综合征(Guillain-Barre Syndrome,GBS)的早期诊断非常重要,对于临床症状不典型的患者,正确诊断成为决定患者预后的关键。GBS患者脑脊液中14-3-3蛋白含量增多,可能的原因为大量神经元被破坏,致其漏入脑脊液所致。Bersano[1]等发现GBS患者脑脊液中存在14-3-3蛋白,并且存在于起病早期的脑脊液中,但早期样本数过少,如果有更多的证据证明GBS急性期患者脑脊液中存在14-3-3蛋白,那么它就可以成为GBS早期诊断的生化标记物。
目的:观察GBS急性期脑脊液中是否存在14-3-3蛋白,探讨其在GBS早期诊断中的意义。
方法:40例GBS住院患者为观察组,所有GBS患者均经过详细的神经系统检查和电生理检查,诊断均符合Asbury[2]等于1990年制定的诊断标准,并且均为急性起病,标本采取前未经免疫药物、血浆置换及激素治疗。25例与观察组同期住院的其它神经系统疾病患者以及10例同期骨科手术患者为对照组,所有GBS组研究对象于起病3天内、第7天、第14天,对照组于入院后留取2ml脑脊液,然后离心10分钟(2000转/分)分别保存在-20℃冰箱备用。采用酶联免疫吸附试验法(Enzyme-linked Immunosorbent Assay,ELIASA)定量检测脑脊液14-3-3蛋白;同时用罗氏P-800全自动生化分析仪检测脑脊液蛋白含量,观察早期GBS患者脑脊液中是否存在14-3-3蛋白,并观察脑脊液14-3-3蛋白与脑脊液蛋白是否具有相关性。应用SPSS17.0统计软件包进行统计学分析。
结果:1、GBS组脑脊液14-3-3蛋白及脑脊液蛋白含量:GBS组在起病3天内、第7天、第14天脑脊液中测得的14-3-3蛋白含量(均数±标准差)分别为6.237±2.627ng/ml、8.369±3.003ng/ml、13.431±6.461ng/ml;脑脊液蛋白含量分别为0.308±0.113g/l、0.378±0.135g/l、0.587±0.273g/l;GBS组3天内5例14-3-3蛋白阳性(≥9 ng/ml),2例脑脊液蛋白阳性(≥0.5g/l);第7天16例14-3-3蛋白阳性,4例脑脊液蛋白阳性;第14天28例14-3-3蛋白阳性,21例脑脊液蛋白阳性,且14-3-3蛋白在GBS起病20~48小时便可在脑脊液中检测出,而脑脊液蛋白大多在起病1~2周方可检测出。发病一周内脑脊液14-3-3蛋白阳性率为52.5%,脑脊液蛋白发病一周内阳性率仅为15%。
2、GBS组各时间点脑脊液中14-3-3蛋白与脑脊液蛋白的相关性:GBS组在起病3天内、第7天、第14天脑脊液中14-3-3蛋白含量与脑脊液蛋白含量的相关系数(γ)分别为0.341(P=0.031)、0.353(P=0.025)、0.581(P=0.000)。两变量在GBS起病早期不具有相关性,在起病第14天相关。
3、对照组脑脊液14-3-3蛋白及脑脊液蛋白含量:对照组14-3-3蛋白含量为6.3034±2.172ng/ml,脑脊液蛋白含量为0.367±0.141 g/l;以脑脊液14-3-3蛋白含量≥9ng/ml为分界值时,对照组中10例非神经系统疾病患者的脑脊液14-3-3蛋白均在正常范围内;2例癫痫、9例偏头痛、5例动脉粥样硬化性脑梗死、2例阻塞性脑积水、5例运动神经元病、2例皮层下动脉硬化性脑病患者的脑脊液14-3-3蛋白也在正常范围内。
结论:通过本研究可得出以下结论:
1、在GBS早期脑脊液中存在14-3-3蛋白,14-3-3蛋白含量与GBS病程相关,疾病早期14-3-3蛋白含量低,随着病程进展,14-3-3蛋白含量增加。
2、用ELISA方法检测脑脊液14-3-3蛋白含量可用于GBS早期诊断。
3、ELISA方法可以定量检测人脑脊液中14-3-3蛋白,并可以避免蛋白质印迹法(Western Blot)检查结果判定的主观性。
4、本试验方法对于临床可疑GBS病人的诊断有很高的敏感度和特异性。