目的:应用人乳腺癌细胞MDA-MB-231和人脐静脉内皮细胞HUVEC,对孕甾烷生物碱衍生物1和2的抗肿瘤转移作用进行评价,并对其抗乳腺癌转移的分子机制进行研究,为后期动物实验评价和候选化合物的发现提供实验依据。方法:1.MTT实验方法测定化合物1和2对MDA-MB-231和HUVEC细胞增殖抑制作用;伤口愈合实验和Transwell小室迁移实验研究化合物1和2对MDA-MB-231和HUVEC细胞迁移能力的影响;Transwell侵袭实验研究化合物1和2对MDA-MB-231和HUVEC细胞侵袭能力的影响;粘附实验研究化合物1和2对MDA-MB-231细胞和HUVEC细胞粘附能力的影响;2.Matrigel胶体外小管形成实验研究化合物1和2对HUVEC细胞管腔形成的影响;3.Western blot方法研究化合物1和2对MDA-MB-23 1细胞中PI3K/Akt通路相关蛋白及磷酸化表达水平的影响,化合物2对HUVEC细胞中PI3K/Akt和MAPK通路相关蛋白及磷酸化表达水平的影响。结果:1.化合物1和2对MDA-MB-231细胞具有较强的抗肿瘤转移作用,有效降低乳腺癌细胞迁移、侵袭、粘附的能力,并具有一定的剂量依赖性;化合物1和2对HUVEC细胞具有显著的抗迁移作用,并降低HUVEC细胞侵袭和粘附的能力,并具有一定的剂量依存性。2.化合物1和2显著抑制HUVEC细胞的小管形成,并具有一定的剂量依存性。3.化合物1和2能显著降低乳腺癌细胞中PI3K-p85、Akt、PKCζ和Integrinβ1蛋白的磷酸化水平,并具有一定的剂量依赖性;化合物2下调HUVEC细胞中Akt、PKCζ 蛋白表达和磷酸化水平,且呈一定剂量依存性;下调JNK、ERK和MAPKp38的磷酸化水平,且呈一定剂量依赖性。结论:1.化合物1和2通过抑制MDA-MB-231细胞的趋化迁移、侵袭和粘附,发挥抗肿瘤细胞转移的作用;化合物1和2显著抑制HUVEC细胞的趋化运动能力、划痕愈合能力、侵袭能力及粘附能力,并降低HUVEC细胞的小管形成能力,表明两个化合物具有抗血管生成作用,其中化合物2的抗血管生成作用更强;2.化合物1和2剂量依存性地下调MDA-MB-231细胞PI3K-p85、Akt、PKCζ和Integrinβ1的磷酸化水平,提示化合物1和2作用于PI3K/Akt通路,通过下调相关信号分子的磷酸化水平来抑制肿瘤细胞的迁移和黏附。化合物2可剂量依存性地降低HUVEC细胞Akt、PKCζ、JNK、ERK和MAPKp38的磷酸化水平,以及Akt、PKCζ的蛋白表达水平,提示化合物2—方面作用于PI3K/Akt通路,抑制HUVEC细胞的迁移和黏附;另一方面作用于MAPK通路,抑制HUVEC细胞小管形成,从而发挥抗血管生成作用。