【摘 要】
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[目的]虽然再灌注治疗可以改善患者的临床结局,但是在治疗的同时却会引发心肌缺血-再灌注损伤（myocardial ischemia-reperfusion injury,MIRI）。缺血预处理可以激活内源性保护机制以减轻MIRI,但临床广泛应用却还有一定局限性。药物预处理可以模拟缺血预处理实现心肌保护效应,更便于围术期临床实践。右美托咪定（dexmedetomidine,DEX）可以减少围术期心血
【基金项目】
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国家自然科学基金（81460044）国家自然科学基金（81860050）；
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[目的]虽然再灌注治疗可以改善患者的临床结局,但是在治疗的同时却会引发心肌缺血-再灌注损伤（myocardial ischemia-reperfusion injury,MIRI）。缺血预处理可以激活内源性保护机制以减轻MIRI,但临床广泛应用却还有一定局限性。药物预处理可以模拟缺血预处理实现心肌保护效应,更便于围术期临床实践。右美托咪定（dexmedetomidine,DEX）可以减少围术期心血管事件、具有保护心肌的效应,但具体机制还不清楚。微小RNAs（microRNAs,miRNAs）通过调控一系列复杂过程在心肌损伤发生发展过程中具有重要的作用。虽然miR-146a是调控心脏功能的重要因子,但是miR-146a-3p在心肌损伤以及DEX预处理保护心肌中的作用尚不可知。因此,阐述miR-146a-3p在DEX实现心肌保护效应中的作用及机制具有重要意义。[方法]采用临时夹闭SD大鼠左冠状动脉前降支30min后再开放120min的方式建立MIRI模型,部分大鼠在心脏缺血前进行右美托咪定（DEX）20μg/kg预处理。采用 2,3,5-三苯基氯化四氮唑（2,3,5-triphenyltetrazolium chloride,TTC）染色来评估心肌梗死面积,比较DEX预处理对心肌梗死面积的影响;通过miRNAs microarray分析DEX预处理对心肌组织miRNAs表达的影响;运用生物信息学筛选关键miRNA,并用双荧光素酶报告实验来验证miR-146a-3p的靶基因。为了模拟在体的MIRI,通过对H9C2心肌细胞进行缺氧3h/复氧2h创建体外研究的细胞缺氧/复氧（anoxia/reoxygenation,A/R）损伤模型。其中,部分H9C2心肌细胞在缺氧前予以10nM DEX进行干预。应用流式细胞仪技术来检测心肌细胞的凋亡率、活性氧簇（reactive oxygen species,ROS）的释放,CCK-8检测细胞活力,实时定量聚合酶链式反应（quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR）来检测miR-146a-3p相对表达水平。通过miR-146a-3p的模拟物（mimics）过表达 miR-146a-3p 或抑制剂（inhibitor）减少miR-146a-3p表达,以观察靶蛋白——白细胞介素-1受体相关激酶1（interleukin-l receptor-associated kinase 1,IRAK1）以及肿瘤坏死因子受体相关因子6（tumor necrosis factor receptor-associated factor 6,TRAF6）、凋亡相关蛋白（Caspase 3、cleaved Caspase 3、BAX）、抗凋亡蛋白（BCL-2）表达水平变化。再者,过表达miR-146a-3p并同时用siRNA敲减靶基因（IRAK1、TRAF6）后,检测信号通路关键蛋白NF-κB p65、IκBα及其磷酸化（p-NF-κB p65、p-IκBα）水平,以及ROS的释放,最终阐述miR-146a-3p在DEX心肌保护中的作用及机制。[结果]1.DEX预处理可以显著减小MIRI导致的大鼠心肌梗死面积（P<0.05）;与缺血-再灌注（IR）组相比,DEX预处理（DP）组有29个miRNAs显著上调,40个miRNAs表达明显下调;经qRT-PCR证实,DEX预处理显著上调了miR-146a-3p的相对表达量（P<0.05）。2.生物信息学分析发现IRAK1及TRAF6的3’-UTR与miR-146a-3p有结合位点;双荧光素报告验证了IRAK1、TRAF6是miR-146a-3p的靶基因。3.DEX预处理可以明显减少A/R导致的H9C2心肌细胞凋亡,明显恢复心肌细胞活性,降低靶蛋白IRAK1、TRAF6表达,减少凋亡相关蛋白（BAX、cleaved Caspase 3）表达,增加蛋白BCL-2表达,差异具有统计学意义（P<0.05）;但Caspase3的表达变化影响不明显（P>0.05）。4.DEX预处理可以明显上调miR-146a-3p表达,显著减少ROS释放,减少NF-κB p65及其磷酸化（P<0.05）;高表达miR-146a-3p联合低表达IRAK1、TRAF6后,DEX预处理则可以进一步减少ROS、NF-κB及其磷酸化（P<0.05）。[结论]1.DEX预处理在减小心肌梗死面积、减轻心肌损伤中具有重要的作用。2.DEX预处理产生的保护心肌的作用机制可能是通过上调miR-146a-3p表达,抑制靶蛋白IRAK1、TRAF6表达,进而抑制NF-κB活化。3.DEX预处理还可以减少ROS释放,减少NF-κB激活,减轻心肌损伤。4.miR-146a-3p可能是研发治疗心血管疾病（尤其是伴随缺血、缺氧损伤）治疗药物的新靶点。
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