HER2靶向载HSV-TK基因纳米泡联合UTND技术诱导胃癌细胞凋亡的实验研究

来源 :中国医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:hjm19840220
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目的:探讨人表皮生长因子受体-2(Human epidermal growth factor receptor-type2,HER2)靶向载单纯疱疹病毒胸苷激酶(Herpes simplex virus-thymidine kinase,HSV-TK)基因/AGM-CBA(agmatine/N,N′-cystamine-bis acrylamide,AGM-CBA)的全氟己烷纳米泡(targeted HER2 AGM-CBA and HSV-TK gene-loaded perfluorohexane nanobubble,t HAHT NB)的体外靶向能力及核定位能力,及t HAHT NB在超声介导纳米泡破坏技术下抑制胃癌细胞增殖、诱导细胞凋亡的作用。研究方法:将实验分为MGC803组及NCI-N87组,通过激光共聚焦显微镜检测t HAHT NB的体外靶向情况,使用Image J软件半定量分析对比两组细胞周围累积荧光密度,及NCI-N87组累积荧光密度与细胞数是否存在相关性;通过激光共聚焦显微镜检测t HAHT NB对NCI-N87细胞的核定位效应;将实验分为低功率聚焦超声组(Low power focused ultrasound,LFUS)、HER2靶向空白纳米泡组(targeted HER2 nanobubble,t HER2 NB)、空白纳米泡组(nanobubble,NB)、t HAHT NB组、t HAHT NB+LFUS组、正常细胞组及空白组,通过MTT法观察不同处理组对NCI-N87细胞生存率的影响,通过Annexin V监测不同处理组诱导NCI-N87细胞凋亡的作用。结果:激光共聚焦显微镜显示与MGC803组相比,NCI-N87组细胞周围可见明显红色荧光;半定量分析显示,与MGC803组相比,NCI-N87组累积荧光密度增高,且与细胞数目呈正相关(=0.9005,<0.01);核定位实验显示NCI-N87组细胞核周围可见明显红色荧光。MTT法显示与t HAHT NB组、t HER2 NB、LFUS组、NB组相比,t HAHT NB+LFUS组的细胞活性明显减低,差异有统计学意义(t=11.48、18.09、18.55、20.25,P<0.01);Annexin V检测结果显示与t HAHT NB组、t HER2NB、LFUS组、NB组相比,t HAHT NB+LFUS组细胞凋亡率显著增高;差异有统计学意义(t=18.00、25.74、25.53、23.23,P<0.01)。结论:t HAHT NB能够靶向识别NCI-N87细胞,联合UTND技术可以使基因在肿瘤细胞核周围浓聚,具备核定位能力,有效地提高了基因转染率,对NCI-N87细胞有明显增殖抑制并诱导其凋亡的作用,为胃癌的非侵入性治疗提供了新思路。
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