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目的:观察橙皮素（hesperetin,HSP）对大鼠离体肾内动脉（rat intrarenal artery,RIA）肌原性反应的影响,并通过抑制剂实验、膜片钳实验、qRT-PCR方法探讨其作用机制。方法:1.离体血管环的制备与固定:将大鼠麻醉后（戊巴比妥40mg/kg）断头处死,剖开腹部将其肾脏取出置于盛有4℃、PH为7.35-7.40 PSS溶液的自制培养皿中,大头针固定后在显微镜下分离出长约2 mm的肾内动脉血管环,用两根长约2 cm、直径40μm的钢丝将其固定于微血管张力记录仪（DMT）的浴槽内。稳定1h后（期间每15 min更换浴槽内的溶液）,用60 mM KCl连续三次刺激已固定好的血管环,每次血管收缩幅度均大于2 m N,且两次收缩幅度差异小于10%时,则视为血管活性符合实验标准,稳定30 min后即可开始正式实验。2.采用微血管张力测定法记录HSP对RIA肌原性反应的作用。向浴槽内加入不同浓度的HSP（1μM、3μM、10μM、30μM、100μM）,观察其对RIA基础张力的作用;向浴槽内分别加入不同浓度HSP（10μM、30μM、100μM）,预孵30 min后分别加入收缩剂60 mM KCl、0.3 mM BaCl2、3μM VP、1μM PE,观察预孵不同浓度HSP对上述四种收缩剂收缩RIA的作用;向浴槽内分别加入收缩剂60 mM KCl、0.3 mM BaCl2、3μM VP、1μM PE,待血管收缩达坪台后加入30μM HSP,观察HSP对RIA的舒张作用;洗脱血管环后再次向浴槽内分别加入四种收缩剂60 mM KCl、0.3 mM BaCl2、3μM VP、1μM PE收缩RIA,达到收缩坪台后,分别加入PKC抑制剂G（?）6983和PKA抑制剂H89预孵30 min,再加入30μM HSP舒张预收缩的血管环,观察蛋白激酶对HSP舒张RIA的作用并探讨其机制。3.采用膜片钳技术记录HSP对RIA血管平滑肌细胞（SMCs）Kir通道电流的作用。向细胞槽内分别加入不同浓度的HSP（10μM、30μM、100μM）,观察对Kir电流的作用;向细胞槽内分别加入HSP（30μM）、HSP（30μM）+G（?）6983（1μM）,观察HSP对RIA SMCs Kir电流的作用,并探讨其作用机制。4.采用q RT-PCR技术测定预孵HSP对RIA中Kir通道及PKC-α、PKC-β的m RNA的表达水平的影响,进一步探讨HSP对RIA的作用机制。结果:1.HSP可改善大鼠离体RIA肌原性反应。HSP（1μM、3μM、10μM、30μM、100μM）对静息离体RIA张力无明显影响,其血管张力分别为（0.08±0.01）m N、（0.09±0.04）m N、（0.10±0.03）m N、（0.10±0.02）m N、（0.09±0.02）m N,差异无统计学意义（P>0.05）;预孵HSP（10μM、30μM、100μM）后可浓度依赖地抑制由60 mM KCl、0.3 mM BaCl2、3μM VP、1μM PE引起的血管收缩。10μM HSP对肾内动脉的抑制率分别为（26.01±5.00）%、（14.98±13.00）%、（23.89±8.00）%、（32.32±12.00）%（P<0.01）;30μM HSP对肾内动脉的抑制率分别为（45.13±11.00）%、（37.46±5.00）%、（44.71±12.00）%、（54.11±9.00）%（P<0.01）;100μM HSP对肾内动脉的抑制率分别为（69.13±5.00）%、（66.78±11.00）%、（84.81±14.00）%、（70.13±8.00）%（P<0.01）。2.PKC抑制剂G（?）6983与PKA抑制剂H89对HSP舒张预收缩RIA的作用。G（?）6983可降低HSP对预收缩RIA的舒张率,KCl（60mM）预收缩组中HSP对RIA的舒张率由（43.00±9.67）%降为（21.35±5.55）%,PE（1μM）预收缩组中RIA的舒张率由（42.88±11.41）%降为（27.84±8.64）%,VP（3μM）预收缩组中RIA的舒张率由（48.14±12.29）%降为（23.3±12.01）%,BaCl2（0.3 mM）预收缩组中RIA的舒张率由（54.31±9.71）%降为（19.22±2.22）%,差异具有统计学意义（P<0.01）;而H89对HSP舒张预收缩RIA无明显作用,KCl（60mM）预收缩组中HSP对RIA的舒张率由（50.21±11.99）%变为（53.43±7.61）%,PE（1μM）预收缩组中RIA的舒张率由（39.81±12.22）%变为（36.31±13.93）%,VP（3μM）预收缩组中RIA的舒张率由（48.39±7.02）%变为（46.65±7.23）%,BaCl2（0.3 mM）预收缩组中RIA的舒张率由（43.24±10.55）%变为（45.82±8.14）%,差异均无统计学意义（P>0.05）。3.HSP对RIA SMCs Kir通道电流的作用。HSP（10μM、30μM、100μM）可浓度依赖地增加RIA SMCs Kir通道电流,与对照组相比,10μM HSP组电流密度增加了（10.90±6.33）%,30μM HSP组电流密度增加了（47.05±3.91）%,100μM HSP组电流密度增加了（93.80±10.67）%,均具有统计学意义（P<0.05,P<0.01,P<0.01）;BaCl2（0.3 mM）可降低由HSP（100μM）增加的Kir电流,与对照组相比,预孵BaCl2后电流密度降低了（77.42±11.84）%,100μM HSP组电流密度增加了（89.66±1.40）%,与100μM HSP组相比,HSP（100μM）+BaCl2（0.3 mM）电流密度降低了（57.20±1.69）%,均有统计学意义（P<0.01,P<0.01,P<0.01）;PKC抑制剂G（?）6983可降低由HSP（30μM）增加的Kir电流,与对照组相比,30μM HSP组较对照组电流密度增加（45.77±4.31）%（P<0.01）,G?6983+HSP组电流密度较30μM HSP组降低（29.58±7.28）%（P<0.01）。4.预孵HSP（30μM）后,与对照组相比,RIA中Kir 2.1通道的m RNA表达水平（1.91±0.23）明显上调,而PKC-α（0.52±0.29）、PKC-β（0.69±0.14）的m RNA表达水平明显下调（P<0.01）。结论:1.HSP对静息状态下的大鼠离体肾内动脉无明显作用;HSP（10μM、30μM、100μM）对由KCl、BaCl2、VP、PE引起的大鼠肾内动脉收缩具有抑制作用,其抑制作用成浓度依赖性;HSP（30μM）舒张KCl、BaCl2、VP、PE引起的大鼠肾内动脉收缩,PKC激酶抑制剂G?6983可减少HSP的舒张作用。2.HSP增加RIA SMCs Kir通道电流,PKC激酶抑制剂G?6983可降低由HSP增加的RIA SMCs Kir通道电流。3.预孵HSP使RIA Kir通道m RNA表达增加、PKC-α和PKC-βm RNA表达减少,HSP对RIA的作用可能是通过PKC-α、PKC-β介导的通路调节Kir2.1通道表达来实现的。