超量表达酵母腺苷甲硫氨酸脱羧酶基因(ySAMDC)对番茄耐热性的影响

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多胺广泛存在于所有生物中,并且在植物的生长发育过程中起重要的作用。S-腺苷甲硫胺酸脱羧酶(SAMDC)是多胺合成途径中的一个关键调节酶基因。SAMDC催化腺苷甲硫氨酸(SAM、AdoMet)形成脱羧的SAM,它为多胺生物合成提供氨丙基供体。因此研究SAMDC的分子特征及调节作用对于探索多胺的生物学功能具有十分重要的意义。番茄(Lycopersicon esculentum Mill.)是世界上生产面积与总产量最高的蔬菜作物,同时也是我国南北各地广泛栽培的夏秋季主要蔬菜。高温是番茄生产重要的限制因子之一,高温易使番茄授粉受精失败,导致落花落果,同时可导致果实品质变劣。因此对番茄耐热性的研究具有重要的现实意义。本研究以通过农杆菌介导法获得的SAMDC基因转化植株为材料,经过分子验证、遗传分析以及园艺学性状观察后,研究转基因材料在高温处理时光合作用、抗氧化酶系统以及内源多胺含量的变化,旨在探讨SAMDC基因超量表达对番茄耐热性的影响,为阐明多胺对番茄耐热性的调控作用提供研究基础。主要研究结果如下:(1)对已获得的46株HygR转基因T0代番茄植株进行了PCR检测,结果有35株含1100 bp ySAMDC基因扩增产物,阳性率为76.1%;对11株PCR检测为阳性的转化植株进行Southern杂交检测,有9株有杂交信号,阳性率为81.8%,表明外源基因成功整合到了这9株转基因植株的基因组中;对9株转化植株的果实进行Northern杂交检测SAMDC基因在各个植株中的表达情况,有7株有表达信号。(2)对T1代的5个株系35S-b2、35S-b5、35S-b6、E8-A7、E8-M2和对照株系进行PCR检测,发现株系35S-b6、E8-A7、E8-M2呈阳性,PCR检测这3个株系的单株,分离比列分别为:8:1、7:3、5:1,不完全符合孟德尔遗传分离规律。(3)以T0代7个转化株系(芽系)和对照植株的果实为材料来分析SAMDC基因对番茄果实性状的影响。实验发现,仅转化株系35S-b2的果实横径和单果均重以及E8-M2的果实纵径低于对照果实,其它均高于对照;转化株系的果实硬度、糖度、Vc含量相比对照都有相应的提高;转化株系的番茄红素含量相比对照有显著增加,其中株系35S-b2,35S-b5,35S-b6,E8-Q4,E8-A7均增加了1倍以上。(4)对T1代的5个转基因株系和对照株系进行高温处理,通过分析番茄叶片光合作用参数和光合色素、抗氧化酶系统、耐热性鉴定指标及多胺含量的变化来揭示转入番茄中的SAMDC基因是否能够提高其耐热性。高温胁迫前后,转化株系的叶片净光合速率、Fv/Fm和叶片相对电导率的变化幅度高于对照株系,而蒸腾速率和气孔导度又是对照株系的变化幅度大于转化株系;叶片光合色素含量、抗氧化酶系统以及游离脯氨酸、谷胱甘肽和多胺含量的变化幅度有的高于对照株系,有的低于对照株系,株系间没有一致的变化规律。因而超量表达SAMDC基因对番茄植株苗期耐热性的影响在T1代不同株系中表现不同,需要在高代纯系中进行验证。
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