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莱克多巴胺(Ractopamine,Rac)是一种β2-肾上腺素能兴奋剂,因具有营养再分配、促进蛋白质合成,增加动物酮体瘦肉率,提高饲料转化率的作用,可能被非法作为饲料添加剂用于畜产品的生产,但其残留对人类健康存在潜在的危害,被禁止或限定在畜产品生产中使用。本研究旨在制备特异性针对莱克多巴胺的单克隆抗体,并建立竞争酶联免疫吸附法(cELISA)用于Rac的残留检测。将阳离子化牛血清白蛋白(cBSA)和半抗原Rac进行偶联,经紫外光谱扫描确定偶联成功,测定偶联物的蛋白浓度为0.70 mg/ml。以此偶联物Rac-cBSA作为免疫原,与试剂盒自带佐剂乳化后免疫6周龄雌性BALB/c小鼠,每次免疫间隔2周,待血清抗体效价明显升高后加强免疫,3天后取小鼠脾细胞和骨髓瘤细胞SP2/O-Ag-14进行融合。同时用混合酸酐法将Rac与鸡卵清白蛋白(OVA)偶联。以偶联产物Rac-OVA作为包被抗原,经间接ELISA试验筛选出阳性细胞株,再用有限稀释法进行多次亚克隆,获得稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为5D2和6B3。经亚类鉴定其免疫球蛋白亚类均为IgM,单抗腹水的间接ELISA效价分别为2×105和1×105。该细胞株经体外培养、传代、冻存和复苏后抗体性质稳定。特异性鉴定结果显示,单抗与Rac的类似物盐酸克伦特罗及两种偶联载体均不发生交叉反应。采用cELISA试验鉴定单抗的敏感性,6B3的IC50为0.0lng/ml,5D2的IC50为0.lng/ml。说明单克隆抗体具有较好的亲和性。将ELISA检测条件进行了优化,得到的最佳反应条件为:包被时间37℃作用3h,封闭条件为37℃作用3h,封闭液选用1%明胶。用方阵滴定法确定最适包被抗原稀释倍数为1:1600,单抗的最适稀释倍数为1:8000,采用cELISA方法建立检测Rac的标准曲线,在0.1ng/ml-100ng/ml范围内呈线性相关,回归方程为Y=-0.4052X+0.0111,相关系数R2=0.9815。用cELISA法检测Rac有着良好的应用前景,但是试剂盒的组成元件和条件还需要进一步探索,最佳反应条件还需要进一步优化。