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目的首先观察大鼠Kupffer细胞与肝实质细胞体外共同培养时肝实质细胞生长、形态及功能状况,建立实验细胞模型。进一步观察不同浓度葡萄糖对大鼠肝细胞白蛋白基因表达的影响。方法(1)原位二步Ⅳ型胶原酶灌注法联合Percoll液密度梯度离心法分离肝细胞与Kupffer细胞;体外进行肝细胞单独培养、肝细胞与Kupffer细胞按6:1比例共同培养,观察不同情况下肝细胞生存时间和形态,每隔24h检测培养上清中白蛋白和ALT、AST的水平,并在36h放免法检测上清液TNF-α、IL-1、IL-6含量。(2)用终浓度分别为3.9mmol/L,7.0mmol/L,11.1mmol/L,22.2mmol/L的葡萄糖处理联合培养体系,以3.9mmol/L组作为对照组,分别于4h、24h留取细胞上清液,全自动生化仪检测白蛋白浓度,放免法检测上清液TNF-α、IL-1、IL-6含量,提取肝细胞RNA及逆转录聚合酶链法(RT-PCR)检测白蛋白mRNA含量。结果(1)单独培养组肝细胞的生长、增殖迅速,并向正常肝细胞的形态演变,肝细胞可培养存活至15d;共同培养组肝细胞细胞生长增殖缓慢,细胞可培养存活至10d。混合培养组上清白蛋白水平在24、36、48、60h比单独培养组低(t=2.980,3.139,2.551,2.605;p<0.05);混合培养组上清ALT、AST水平在24、36、48、60h高于于单独培养组(ALT t=3.055,2.666,2.824,3.108;p<0.05;AST t=2.632,2.446,3.090,2.895;p<0.05),联合培养组Kupffer细胞保持IL-1、IL-6和TNF-α分泌功能,而单独培养组未检测到IL-1、IL-6和TNF-α。(2)不同浓度葡萄糖处理肝细胞4h后,各组肝细胞上清中IL-1,IL-6,TNF水平与对照组相比差异无统计学意义,与此同时,各组肝细胞上清中白蛋白水平与肝细胞白蛋白mRNA表达与对照组相比下降不明显;而培养24h以后,各组肝细胞上清中IL-1,IL-6,TNF水平与对照组相比上升明显,并且,随着葡萄糖浓度的增加肝细胞上清中IL-1,IL-6,TNF浓度不断上升,并且呈现剂量依赖关系,各组肝细胞上清中白蛋白水平与肝细胞白蛋白mRNA表达与对照组相比下降明显,呈现剂量依赖关系,与肝细胞上清中IL-1,IL-6,TNF水平变化一致。结论(1)肝实质细胞和Kupffer细胞在适宜的培养条件下可进行共同培养,kupffer细胞分泌细胞因子的功能和肝细胞白蛋白合成分泌功能保持良好,可用于实验研究。(2)高浓度葡萄糖糖能促进Kupffer细胞释放IL-1、IL-6和TNF-α,间接抑制大鼠肝细胞白蛋白mRNA的表达。