第一部分根尖牙乳头干细胞的分离、培养与鉴定以及三碘甲腺原氨酸最佳刺激浓度筛选目的:分离、培养并鉴定根尖牙乳头干细胞（stem cell from apical papilla,SCAPs）,制备三碘甲腺原氨酸（T3）条件培养基并筛选最佳刺激浓度。方法:收集根尖未闭合离体恒磨牙,通过酶消化法与组织块贴壁法结合运用,培养原代根尖牙乳头干细胞,传代至p3至p5后用于后续的实验。诱导多向分化实验验证其分化潜能,流式细胞技术检测细胞表面分子标志。1 mol/L Na OH溶解T3粉末后制备连续梯度浓度的T3条件培养基,培养5 d,而后检测各浓度组的碱性磷酸酶活性,选取差异最显著浓度的作为实验浓度进行后续实验。此外,使用CCK-8试剂盒绘制增殖曲线,流式细胞术检测细胞周期,检验所选实验浓度对SCAPs增殖能力的影响。结果:本实验自未成熟恒磨牙根尖牙乳头组织中分离出纺锤状细胞,细胞经诱导后可成骨、成脂、成软骨向分化,细胞表面分子CD29、CD90阳性而CD34、CD45阴性。用多个浓度的T3条件培养基刺激SCAPs 5 d后,测定ALP表达及活性并绘制柱状图。结果显示10^-9mol/L T3条件培养基显著提高ALP表达及活性,且高于其他各组。10^-9mol/L T3条件培养基对SCAPs的增殖能力没有显著影响。结论:所分离培养细胞为根尖牙乳头干细胞,10^-9mol/L T3可能对根尖牙乳头干细胞成骨向分化有促进作用且不显著影响细胞的增殖能力。第二部分T3对根尖牙乳头干细胞成骨分化的影响目的:探究T3对根尖牙乳头干细胞成骨分化的影响方法:T3条件培养基刺激后,使用real-time RT-PCR检测成骨分化相关基因的表达情况,Western blot和免疫荧光染色检测成骨分化相关蛋白的表达情况。通过ALP染色和茜素红染色,检测T3对根尖牙乳头干细胞矿化能力的影响。结果:real-time RT-PCR结果显示T3条件培养基诱导后,成骨分化相关基因（RUNX2、ALP、DMP1、OSX、OCN）的表达量与对照组相比显著升高。Western blot和免疫荧光染色结果表明T3条件培养基诱导后,成骨向分化相关蛋白（RUNX2、ALP、DMP1、OSX、OCN）的表达水平上升。ALP染色结果显示经T3条件培养基诱导后深染色细胞显著增多,而茜素红染色中,实验组较对照组的红染矿化结节更多。结论:10^-9mol/L T3促进了根尖牙乳头干细胞的成骨分化。第三部分T3对根尖牙乳头干细胞MAPK信号通路的影响目的:初步探究MAPK信号通路在T3促进根尖牙乳头干细胞成骨向分化过程中的作用。方法:T3条件培养基诱导后Western blot检测MAPK信号通路中各蛋白的磷酸化水平变化,并检验相应的通路抑制剂对T3诱导的SCAPs成骨向分化的影响。结果:经T3条件培养基诱导后,ERK的磷酸化水平上升。而JNK、p38的磷酸化水平没有发生明显改变。在使用U0126抑制ERK通路后,成骨向分化相关蛋白表达量较T3诱导组下降,ALP染色中深染色细胞和茜素红染色中的钙结节数量较T3诱导组减少。结论:ERK/MAPK信号通路在T3促进根尖牙乳头干细胞成骨分化过程中起到调控作用。