J亚群禽白血病病毒相关的鸡急性纤维肉瘤人工造病试验

来源 :山东农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:bj_mark001
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禽白血病病毒(Avian Leukosis Virus,ALV)是以引起禽各种造血细胞肿瘤性增生为特征的一类反转录病毒群,其中能感染鸡的可分为A、B、C、D、E和J6个亚型,临床上常见的为A、B和J亚型,而C、D亚型在临床上相对少见,E亚群主要以前病毒的形式存在于宿主基因组而广泛存在。ALV-J是1988年英国Campton动物保健协会首先分离得到的。近几年在我国已先后从商品肉鸡、蛋鸡、麻鸡中发现ALV-J,最近从临床血管瘤病例中也分离到ALV-J。早在100年前,就已发现了鸡的急性肉瘤,后来证明是由与ALV-A或ALV-B相关的带有肿瘤基因的急性ALV引起,其细胞类型是一种纤维细胞瘤,但一直没有ALV-J相关的急性纤维肉瘤的报道。本研究从30多日龄817肉杂鸡颈部疑似纤维肉瘤中分离到一株ALV-J,该ALV作为辅助病毒能在较短时间诱发急性纤维肉瘤,对其致病性进行了研究。1攻毒用病料来源与病毒制备由山东农业大学动物科技学院家禽肿瘤病研究室于2010年从山东某鸡场30多日龄颈部皮下出现肉瘤的817肉杂鸡个体中采集到。本研究中,首先将在-80℃保存的肉瘤组织与无菌生理盐水按1:5(质量体积比)研磨成悬液,然后以12000r/min,离心10min后,再用0.22m滤器过滤获无细胞滤液。病料过滤液直接接种实验鸡或接种于DF1细胞用于病毒分离或增殖。2人工感染诱发的急性纤维肉瘤眼观病变病毒引起的鸡产生的急性纤维肉瘤主要附着在攻毒部位皮下,将完整的大肿瘤切开后,可以看到许多大小不同且相互独立的次级纤维肉瘤结节。3病理组织学观察病理组织学观察,所有肉瘤都表现类似的病理组织学变化。在肉瘤组织不同的区域,表现不同的细胞类型,即使在同一切片中甚至同一视野的不同部位,也可能存在不同类型的细胞。有的区域细胞主要呈椭圆形或梭形或不规则形,但大部分区域是呈细长的两端尖状的典型的纤维细胞。在肿瘤内,纤维细胞呈束状排列,细胞核形状不一,有圆形、长圆形、不规则形状,胞核大小不一。有的胞核似有分裂现象。4不同注射部位接种病料滤过液采用颈部皮下、胸肌、腹腔为接种部位,分别于1日龄以0.2ml/只的剂量将病料滤过液接种经棉拭子P27抗原检测和血清抗体检测呈阴性的817肉杂鸡。结果显示:颈部皮下、胸肌、腹腔三个部位攻毒鸡的肿瘤发生率分别为100%(20/20)、95.2%(20/21)、100%(20/20)。5不同品种鸡接种病料滤过液试验选取棉拭子P27抗原检测和血清抗体检测呈阴性的1日龄白羽肉鸡,海兰褐,SPF鸡,817肉杂鸡4个品种鸡,分别于1d以0.2ml/只的剂量采用腹腔接种新鲜肿瘤组织研磨。结果显示:白羽肉鸡、海兰褐、817肉杂鸡和SPF鸡急性纤维肉瘤率分别为78.3%、63.2%、85.0%、90.0%。6不同剂量病料滤过液接种实验以棉拭子P27抗原检测和血清抗体检测呈阴性的1日龄817肉杂鸡和SPF鸡为对象,首先将未经稀释的病料滤过液及其1:10、1:100、1:1000、1:10000和1:100000的稀释液以0.2ml/只的剂量颈部皮下接种817肉杂鸡和SPF鸡。结果显示:病料过滤液病料滤过液直接接种817肉杂鸡和SPF鸡的肿瘤发生率均为100%(10/10),10倍稀释后攻毒鸡的肿瘤发生率分别为80%(8/10)和100%(10/10),100倍稀释后攻毒鸡的肿瘤发生率分别为100%(10/10)和80%(8/10),1000倍稀后攻毒鸡的肿瘤发生率分别为40%(4/10)和50%(5/10),更高倍数稀释后攻毒鸡没有肿瘤发生。7细胞培养上清液接种鸡将病料滤过液接种DF-1细胞的上清液接种6只1日龄817肉杂鸡,每只颈部皮下接种0.2mL。结果显示:细胞培养上清造成33.3%(2/6)的817肉杂鸡发生肉瘤。
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