论文部分内容阅读
斜纹夜蛾是一种广泛分布的农业害虫，研究其中肠特异性表达基因的功能，对未来开发中肠特异性农药控制害虫危害具有重要意义。 本文利用基因超表达方法研究斜纹夜蛾幼虫中肠克隆的未知功能基因（暂命名为Slun17）的功能。将Slun17基因插入到piggyBac载体中，构建了Slun17-pigBacA3EGFP超表达载体。通过显微注射将此超表达载体注射到斜纹夜蛾的受精卵中，获得具有荧光标记的Slun17超表达个体。利用常规分子生物学和免疫组化方法，分析Slun17在超表达幼虫中的整合、转录和翻译情况。统计Slun17超表达个体发育过程中的虫体体重变化、幼虫各龄期经历时间、营养指标等指标，分析Slun17超表达对昆虫发育的影响。通过病毒喂食实验分析Slun17超表达对昆虫抗病毒能力的影响。通过上述实验推测Slun17基因在中肠表达所起到的可能作用。主要结果如下: (1)将Slun17-pigBacA3EGFP载体注入斜纹夜蛾早期胚胎中，通过绿色荧光蛋白筛选Slun17超表达幼虫。待幼虫长到4龄期，提取幼虫基因组DNA，PCR检测结果表明外源基因已经整合到斜纹夜蛾幼虫的基因组中。 (2)提取幼虫中肠RNA，通过RT-PCR和半定量PCR方法检测Slun17基因转录水平的变化;用免疫组化的方法检测SLUN17蛋白的表达变化。结果发现Slun17基因的mRNA水平和蛋白表达水平都明显提高，表明Slun17基因已实现了超表达。 (3)对Slun17超表达个体的生长发育情况进行观察，统计其发育过程中的虫体体重、幼虫各龄期经历时间、营养指标和成虫产卵量等指标，结果发现Slun17超表达个体的生长发育和繁殖与野生型个体无显著差异。 (4)对Slun17超表达个体和野生型个体喂食核型多角体病毒后，提取感染不同时间幼虫体内的病毒，统计发现核型多角体病毒在Slun17超表达幼虫体内增殖的速度不及在野生型幼虫体内增殖的速度。将感染病毒的幼虫进行常规组织切片观察，发现Slun17基因表达上调后，增强了幼虫对病毒的耐受力。 上述结果表明:Slun17基因在斜纹夜蛾幼虫的生长发育过程中并无直接的调控作用;该基因表达的蛋白分泌后到达围食膜和肠壁细胞之间的游离端以及基底膜处，使中肠肠壁细胞两侧增厚，从而对病毒及其他有害物的侵染有一定的阻碍作用。