【摘 要】
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在全球范围内,玉米作为重要的粮食作物和经济作物,其种植面积及产量逐渐上升。而随着时间推移,全球耕种土地的盐碱化,使得盐敏感作物玉米的生产受到限制,因此提高玉米对盐胁迫的耐受性是玉米生产发展的迫切需要。全基因组关联分析是解析玉米耐盐胁迫遗传基础的重要研究手段,相比于连锁定位,它的精度高,研究耗时短,可获得多个与目标性状相关的候选基因。CRISPR/Cas9基因编辑技术已广泛应用于植物基因功能的研究,
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在全球范围内,玉米作为重要的粮食作物和经济作物,其种植面积及产量逐渐上升。而随着时间推移,全球耕种土地的盐碱化,使得盐敏感作物玉米的生产受到限制,因此提高玉米对盐胁迫的耐受性是玉米生产发展的迫切需要。全基因组关联分析是解析玉米耐盐胁迫遗传基础的重要研究手段,相比于连锁定位,它的精度高,研究耗时短,可获得多个与目标性状相关的候选基因。CRISPR/Cas9基因编辑技术已广泛应用于植物基因功能的研究,为作物中重要性状的遗传改良提供了强有力的工具。本研究通过纸卷水培的方法对玉米自然变异群体进行盐处理获得表型数据,通过全基因组关联分析的方法挖掘与盐胁迫相关的候选基因,利用CRISPR/Cas9基因编辑技术获得候选基因的功能缺失突变体,为探索玉米响应盐胁迫的关键基因及其分子机制,改良玉米抗盐性提供基因资源和理论基础。主要研究成果如下:(1)采用纸卷水培的方法,选择150 mM NaCl的处理浓度,对全球具有代表性的250份玉米自然变异群体进行盐处理,获得103份可靠的表型数据。表型数据包括玉米干重、株高、侧根数、中胚轴和根长。(2)利用全基因组关联分析的研究方法将基因型数据与表型数据相关联,发掘候选基因。共获得131个候选基因,与干重相关的候选基因24个,株高相关的候选基因75个,中胚轴相关的候选基因10个,侧根数相关的候选基因20个,根长相关的候选基因29个。根据基因功能注释及拟南芥同源基因生物研究报道,最终确定6个与盐胁迫相关的候选基因,它们分别是基因GRMZM2G356260、GRMZM2G110735、GRMZM2G071630、GRMZM2G109527、GRMZM2G154628、GRMZM5G871347。(3)构建6个玉米候选基因过量表达载体,利用狗尾草的遗传转化技术,获得T0代转基因植株。(4)利用CRISPR/Cas9基因编辑技术,对6个玉米盐胁迫候选基因在狗尾草中所对应的同源基因进行基因编辑,获得T0代基因功能缺失突变体植株。
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