【摘 要】
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目的:探究“易层”贴敷透皮接收液有效成分及其干预滑膜炎症与纤维化的机制。方法:1、HPLC-Q/TOF MS-MS法测定“易层”贴敷透皮接受液的有效成分。2、大鼠KOA模型造模成功后,使用“易层”贴敷治疗,比较KOA组、正常组、易层组三组大鼠膝关节滑膜HE染色切片;比较正常大鼠与KOA大鼠滑膜组织NLRP3,ASC,以及被剪切前后的Caspase-1的蛋白与基因的表达。3、大鼠KOA模型造模成功后
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目的:探究“易层”贴敷透皮接收液有效成分及其干预滑膜炎症与纤维化的机制。方法:1、HPLC-Q/TOF MS-MS法测定“易层”贴敷透皮接受液的有效成分。2、大鼠KOA模型造模成功后,使用“易层”贴敷治疗,比较KOA组、正常组、易层组三组大鼠膝关节滑膜HE染色切片;比较正常大鼠与KOA大鼠滑膜组织NLRP3,ASC,以及被剪切前后的Caspase-1的蛋白与基因的表达。3、大鼠KOA模型造模成功后,使用“易层”贴敷治疗,比较KOA组、正常组、易层组三组大鼠的膝关节滑膜组织中TGF-β、TIMP1、Col1A1等纤维化相关蛋白的蛋白与基因表达水平。4、LPS诱导的滑膜成纤维细胞炎症模型,在使用"易层"贴敷透皮接受液冻干粉干预后,比较空白组、LPS组、易层组三组滑膜成纤维细胞炎症小体复合物NLRP3,ASC,Caspase-1的蛋白与基因表达水平。5、LPS干预诱导的滑膜成纤维细胞炎症模型,在使用“易层”贴敷透皮接受液冻干粉干预后,空白组、LPS组、易层组三组中TGF-β、TIMP1、Col1A1的蛋白与基因表达水平。结果:1、HPLC-Q/TOF MS-MS示“易层”贴敷透皮接受液中主要成分包括:奎宁酸、芹菜甙元、木霉素A金合欢素、牡荆内酯、白杨素、6-甲氧基汉黄芩素、刺五加酸、肉豆蔻酸、紫花前胡素、羌活醇、亚油酸十八碳-9-烯酸、棕榈酸甲酯、硬脂酸、软脂酸。2、KOA大鼠滑膜组织中炎症小体的复合物NLRP3,ASC,Caspase-1、p10的蛋白和基因表达水平相较于正常组的大鼠滑膜组织均显著上调（P<0.05）;使用“易层”贴敷治疗后,炎症小体的复合物NLRP3,ASC,Caspase-1、p10的蛋白和基因表达水平均显著下调（P<0.05）。3、KOA大鼠滑膜组织中TGF-β、TIMP1、Col1A1等纤维化相关因子的蛋白和基因表达水平相较于正常组的大鼠滑膜组织均显著上调（P<0.05）;使用“易层”贴敷治疗后,TGF-β、TIMP1、Col1A1等纤维化相关因子的蛋白和基因表达水平均显著下调（P<0.05）。4、LPS组滑膜成纤维细胞中炎症小体的复合物NLRP3,ASC,Caspase-1、p10的蛋白和基因表达水平相较于正常组均显著上调（P<0.05）;使用“易层”贴敷透皮接受液冻干粉干预后,炎症相关因子NLRP3,ASC,Caspase-1、p10蛋白和基因表达水平均显著下调（P<0.05）。5、LPS组滑膜成纤维细胞中TGF-β、TIMP1、Col1A1等纤维化相关因子的蛋白和基因表达水平相较于正常组均显著上调（P<0.05）;使用“易层”贴敷透皮接受液冻干粉干预后,纤维化相关因子TGF-β、TIMP1,Col1A1蛋白和基因表达水平均显著下调（P<0.05）结论:1、KOA中纤维化的滑膜中观察到NLPRP3/Caspase-1炎症小体活化并介导滑膜炎症,“易层”贴敷可有效缓解滑膜纤维化,并抑制NLPRP3/Caspase-1炎症小体的活化。2、“易层”贴敷可以通过抑制TGF-β、TIMP1、Col1A1的蛋白和基因表达改善KOA大鼠膝关节滑膜纤维化。
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