奶牛结核病是严重危害人类身体健康和公共卫生安全、阻碍畜牧业生产和经济发展的重要人畜共患传染病,目前没有适合的疫苗和快速精确的检测技术。对于规模化奶牛场来说,全面实施“检疫、监测、消毒、扑杀”等综合防治措施,是预防、控制和净化结核病的有效途径。我们对奶牛结核病的常规检测方法皮内变态反应试验进行比较研究,认为比较变态反应(SICCT)可以排除一部分禽型PPD反应阳性牛,提高了特异性,更适合于在控制或稳定控制地区开展结核病净化检测；对单纯颈部皮内变态反应(SICT)阳性牛进行病原学检测,发现非结核分枝杆菌(NTM)的分离率远高于牛分枝杆菌；建立“规模化奶牛场结核病风险评估模型”,制定《规模化奶牛场结核病风险评估技术规范》,用于科学评价规模化奶牛场对结核病的防控水平；在分析历年上海奶牛结核病监测数据、奶牛场和从业人员流行病学调查情况,以及人间结核病流行情况等数据的基础上,对上海地区奶牛结核病的监测、净化、防控现状进行评估,提出防控净化方案和建议；制定《规模化奶牛场结核病防控和净化技术规范》,在试验奶牛场开展示范应用,取得了良好的效果。1.变态反应和比较变态反应在奶牛结核病检测中的应用研究为了比较分析单纯颈部皮内变态反应(SICT)和比较变态反应(SICCT)检测方法的优缺点,为临床应用提供依据。对4个奶牛场2000头奶牛进行SICT和SICCT检测。结果显示,1745头试验牛中,进口牛型PPD和国产牛型PPD的SICTP日性牛符合数为19头,阳性符合率为64.41%(19/29.5)；1107头试验牛中,进口牛型PPD的SICT和SICCT两者之间的阳性符合数为5头,阳性符合率为55.56%(5/9)；1316头试验牛中,国产牛型PPD的SICT和SICCT两者之间的阳性符合数为3头,阳性符合率为27.27%(3/11)。试验结果表明SICT敏感性较高,在结核病流行地区,采用SICT对全群进行普检,有利于结核感染牛的早期检出,加快结核病控制的步伐。但在结核病已达到控制或稳定控制的地区,仅仅靠单一的SICT,常出现较多的非特异性干扰,不利于结核病的净化。与SICT相比,SICCT可以排除一部分禽型PPD反应阳性牛,提高了特异性,更适合于在控制或稳定控制地区开展结核病净化检测。2. SICT阳性牛的病原分离与鉴定采用细菌分离培养、免疫色谱法初筛、基因分型和菌种鉴定等方法,对54头SICT阳性牛进行病原分离和鉴定,从118份组织样本中分离到16株抗酸阳性菌,其中12株为分枝杆菌,分枝杆菌分离率为10.2%(12/118)。12株分枝杆菌中有1株为牛分枝杆菌,其他1l株为禽分枝杆菌、土地分枝杆菌等非结核分枝杆菌(NTM)。牛分枝杆菌与NTM分别占分离株的8.3%(1/12)和91.7%(11/12)。病原学检测结果说明,SICT检测方法存在较高的非特异性,为确保检测结果的准确性,有必要采用一种以上的检测方法进行确诊。同时,可以将分枝杆菌快速分离培养及菌种鉴定检测技术引入到对结核病阳性牛的实验室诊断中,进一步提高牛结核病检测的特异性。3.上海地区规模奶牛场结核病防控水平调查和现状评估在调查分析历年来上海奶牛结核病监测情况、奶牛场和从业人员结核病防控水平的基础上,结合《上海市中长期动物疫病防治规划(2013—2020年)》、《牛结核病防治技术规范》、《2009—2015年布鲁氏菌病结核病防治规划大纲》要求,对规模化奶牛场结核病的监测、净化、防控等方面进行现状评估,并提出防控建议和方案。4.奶牛场结核病风险评估模型的建立和验证为了降低规模奶牛场结核病的传播风险,在研究和确定影响奶牛场结核病传播和流行因素的基础上,采用“德尔菲法”,从场址位置、场内布局、设施设备、饲养管理及卫生防疫、人员管理、监测和疫情发生史、经济因素等七个方面选出48项为风险因子,并确定每项因子的权重,用“定性风险分析”方法将风险级别划分为“高风险”、“中等风险”和“低风险”三个级别,从而建立“规模化奶牛场结核病风险评估模型”。通过验证和初步应用,表明该模型可以用来评价规模化奶牛场对结核病的防控水平,有利于对规模化奶牛场开展结核病风险管理工作。5.规模化奶牛场结核病防控和净化措施的制定和应用效果为了指导规模化奶牛场结核病防控和净化工作,我们在对奶牛场开展结核病防控水平调查和结核病防控技术研究的基础上,结合规模化奶牛场结核病风险评估结果,制定了一套适用于上海地区规模化奶牛场的结核病防控和净化措施,编制了《规模化奶牛场结核病防控和净化技术规范》。在2012年～2013年,选择了4家规模化奶牛场进行示范应用、监测和验证。比较4个示范奶牛场在2010年-2011年和2012年～2013年2个时间段结核病监测情况,其平均阳性率由0.48%下降至0.22%；平均阳性牛数量由39.5头减少至18头。以SPSS软件统计分析4个示范奶牛场在2010年～2011年和2012年～2013年阳性率数据,差异显著(P<0.05)。实验证明,结核病防控净化技术规范有良好的应用效果,且在中小规模奶牛场的实施效果要好于在大型规模化奶牛场。总结1.比较分析SICT和SICCT两种检测方法。SICT敏感性较高,在结核病流行地区有利于结核感染牛的早期检出；SICCT特异性较高,更适合于在控制或稳定控制地区开展结核病净化检测。2.对SICT阳性牛进行病原分离和鉴定,牛分枝杆菌分离率仅为1.9%(1/54),SICT检测方法存在较高的非特异性,为确保检测结果的准确性,有必要采用一种以上的检测方法进行BTB确诊。3.调查分析历年上海地区奶牛结核病监测数据、奶牛场结核病防控水平和奶牛场从业人员基本情况,以及人间结核病流行情况等数据,对结核病防控现状进行评估,并提出防控建议和方案。4.建立“规模化奶牛场结核病风险评估模型”,并编制《规模化奶牛场结核病风险评估技术规范》。规模化奶牛场结核病风险评估模型是一个便于操作的简易评价体系,可以用来衡量规模化奶牛场对结核病的防疫能力,评价规模化奶牛场对结核病的防控水平。5.根据结核病防治规划和技术规范,以及上海地区奶牛结核病防控现状和实践经验,制定《规模化奶牛场结核病防控净化技术规范》,在4家规模化奶牛场进行示范应用、监测和验证,取得了良好的应用效果。