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原发性肝细胞癌（primary hepatocellular carcinoma,HCC）是世界范围内最常见的恶性肿瘤之一。尽管随着肝脏手术的不断改善,手术切除肝细胞癌的患者预后仍不能令人满意,其中术后复发的主要原因就是化疗耐药。近年来,研究报道肝癌的发生发展与NFκB的诱发活化有密切关系。核因子κ. B （nuclear factor kappa B, NFκB）作为细胞内重要的核转录因子,近年来研究表明肿瘤细胞增殖和凋亡相关基因,肿瘤的生长调控与核转录因子κB有密切相关。如果能阻断其中的通路,用阻断剂辅助化疗药物将提高肝癌化疗的疗效,将提高肝癌治疗效果。NFκB除调节许多细胞因子、生长因子的转录,参与细胞的增殖与凋亡外,还能直接作用于细胞周期或DNA复制,导致肿瘤的发生发展。阻断NFκB信号转导通路将有助于增强化疗药物对肝癌的治疗疗效。研究表明,阿霉素除了能够引起NFκB进入细胞核以控制转录调控之外,还能直接引起NFκB的表达升高,吡咯烷二硫代氨基甲酸盐（Pyrrolidine dithiocarbamate,PDTC）是一种抗氧化剂,也是一种特异性NFκB抑制剂,可在NFκB活化通道的不同水平发挥抑制作用,如抑制NFκB P65亚单位,抑制IκB的降解或减少NFκB的核移位。研究证实NFκB在人肝癌组织中的广泛表达和激活。PDTC可作为一种研究方法抑制NFκB通路,观察PDTC通过该通路对肝癌细胞增殖、凋亡、粘附侵袭能力的影响及机制；同时观察与传统化疗药物阿霉素（Adriamycin/doxorubicine,ADM）联合应用是否具有协同作用,研究其相关机制。第一部分PDTC对肝癌HepG2细胞增殖凋亡、侵袭的体外实验研究目的：探讨核转录因子κB（NFκB）抑制剂吡咯烷二硫代氨基甲酸盐（pyrrolidine dithiocarbamate, PDTC）联合阿霉素对人肝癌HepG2细胞增殖侵袭能力的影响。方法：采用MTT法检测不同浓度PDTC对肝癌HepG2细胞增殖的影响；流式细胞术（PI单染）检测PDTC对细胞周期和凋亡率的影响；采用细胞爬片免疫组化染色方法检测PDTC对NF K Bp65和与肿瘤侵袭有关的基质金属蛋白酶-2（MMP-2）、基质金属蛋白酶阻止抑制剂-2（TIMP-2）表达的影响；侵袭、粘附实验检测PDTC对细胞粘附侵袭能力的变化。结果：（1）PDTC处理后对照组细胞存活率降低,且这种抑制作用呈现剂量-时间效应；（2）处理组能将细胞阻滞在G0／G1期,与对照组相比差异有统计学意义；PDTC 50μmol·L-1组引起细胞的凋亡率为16.10%,与对照组的5.80%相比,差异有统计学意义；（3）经PDTC处理后的免疫组化染色得分NFκBp65、MMP-2分别为（5.80±0.80）,（2.75±0.74）,对照组为（5.25±0.72）,两组间差异有意义；（4）PDTC作用60,90min后对Matrigel胶的粘附率为（68.02±12.14）%,（58.23±10.42）%,与对照组相比,差异有统计学意义。细胞小室侵袭实验检测结果显示,PDTC组侵袭细胞数分别为（67.31±9.53）,与空白对照组相比（P<0.05）,两组有统计学差异。结论：PDTC能抑制肝癌HepG2细胞生长,呈现剂量-时间依赖性,并能将细胞阻滞在G0／G1期,促进细胞凋亡；经PDTC作用后的细胞,粘附及侵袭能力均下降,说明PDTC能抑制与肿瘤转移复发有关的粘附、侵袭能力。机制可能与PDTC通过抑制NF K B的激活,能降低NF K Bp65,MMP-2的表达,抑制肿瘤侵袭有关。第二部分NFκB抑制剂PDTC联合阿霉素对肝癌HepG2细胞增殖的协同抑制作用目的：探讨核转录因子κB（NFκB）抑制剂吡咯烷二硫氨基甲酸盐（PDTC）与阿霉素（ADM）联合应用对抑制HepG2细胞增殖的协同抑制作用及其机制。方法：培养人肝癌HepG2细胞株,MTT法检测不同浓度的PDTC与阿霉素联用后对肝癌细胞的增殖影响,利用中效原理计算出中效剂量和合用指数,判定两药合用效果；流式细胞术检测PDTC联合阿霉素后细胞周期和细胞凋亡率的变化；细胞爬片免疫组化染色法将侧PDTC与阿霉素联用后细胞核转录因子κB P65表达的影响。结果：（1）联合应用较单用组能抑制细胞生长,联合应用后与阿霉素单用,在小剂量时即表现出明显的抑制作用,并呈现剂量依赖性。按中效方程式计算出单用时,HepG2细胞单独用ADM、PDTC后中效浓度分别为250.51ng·ml-1,109.52μmol·L-1,联用后中效浓度分别ADM为ng·ml-1,PDTC为29.11μmol·L-1。ADM单用使合用的4.29倍,PDTC单用使合用的3.76倍。量效曲线可知二者联用效应<0.82时,能产生协同效应；（2）ADM单用组有（36.67±6.65）%细胞阻滞在G2／M期,凋亡率为（85.00±5.00）%。而PDTC单用组约有（78.33±9.07）%阻滞在G0／G1期,此组细胞凋亡率为（11.00±2.65）%.联合作用组阻滞在G0／G1期,此期细胞数为（85.00±5.00）%,联用组凋亡率为（31.33±8.62）%,与空白对照组和单用组相比,差异有统计学意义；（3）经两药联用后P65处理组蛋白阳性表达率评分为2.35±0.54,对照组、阿霉素单用组、PDTC单用组分别为5.35±0.83,5.45±0.78,3.05±0.62,联用组与对照组相比有统计学差别。结论：体外实验PDTC和ADM均可抑制肝癌细胞的生长,二者联用后抑制作用更明显,对肝癌细胞具有协同抑制作用；PDTC联合阿霉素促进细胞凋亡作用更明显,引起细胞周期G0／G1期阻滞；阿霉素作用后,能使NFκBp65表达增加,联用后能使NFκBP65表达降低,机制可能是PDTC与阿霉素联用后能阻断阿霉素引起的NFκB活化,降低NFκB核表达有关,使两药起联合增敏的作用。