基于微球的新型免疫检测方法及其应用研究

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传统的ELISA免疫检测的免疫反应发生在在载体表面,其缺点包括:反应效率低,反应速度慢以及灵敏度较低等。基于微球的免疫检测方法具有如下优点:(1)微球具有高的偶联量。(2)易于分离。(3)反应效率高以及速度快。(4)可以对微球进行编码实现自动、快速高通量检测的目的等。因此,以微球为载体的免疫分析方法成为当前研究的热点。  本研究分别建立了基于磁性微球和荧光编码微球的免疫学检测方法,并对其应用可行性进行了分析研究。主要研究内容如下:  1.基于磁性微球检测猪细小病毒( Porcine Parvovirus,PPV)抗体的新方法  构建了基于磁性微球检测猪细小病毒抗体的新方法。结果表明:本方法检测限可以达到血清稀释2560倍,线性范围为血清稀释80倍-2560倍,检测限和线性范围均比ELISA方法(检测能力为血清稀释160倍,线性范围为血清稀释40倍-160倍)有较大的提高;对70份猪血清样品的检测结果与商品ELISA试剂盒检测结果比较,检测方法诊断灵敏度为100%,特异度为86.5%,诊断符合率为95.7%。  2.CdTe量子点标记芽孢的荧光编码微球构建及应用研究  合成了羧基修饰的水溶性CdTe量子点,以CdTe量子点为荧光标记物、以枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)芽孢为载体构建了新型的荧光编码微球。采用不同的技术如激光共聚焦扫描显微镜、透射电子显微镜、扫描电子显微镜、荧光光谱分别对量子点、芽孢及芽孢@CdTe编码微球进行了表征分析,证实了量子点能牢固结合到芽孢的表面,并形成单分散性良好的芽孢@CdTe编码微球悬浮胶体体系。此外,还证实了不同颜色的芽孢@CdTe编码微球的荧光具有独立性。以猪细小病毒抗体检测为模型,初步考察了采用这种荧光编码微球实现免疫测定的可行性,实验结果表明:芽孢@CdTe荧光编码微球可以应用于免疫学检测中,在免疫荧光分析、高通量免疫检测方面有良好的应用前景。
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