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目的:利用体外心肌细胞缺氧损伤模型，将靶向唯BH3蛋白Bim基因的siRNA转染大鼠心肌细胞，抑制Bim的表达，观察心肌细胞凋亡的情况，探讨Bim在缺氧致大鼠心肌细胞凋亡中的作用及内质网信号通路的机制。方法：1、将出生1-3天的大鼠心肌细胞进行原代培养，利用抗a-横纹肌肌动蛋白免疫组化法进行心肌细胞鉴定。2、将心肌细胞缺氧不同时间，分别缺氧0h、3h、6h、12h、18h、24h。利用westernblotting法检测Bim蛋白的表达，筛选出Bim表达高峰的时间点。3、设计并化学合成3对靶向Bim的siRNA：siRNA1、siRNA2、siRNA3。用脂质体法将Bim-siRNA转染心肌细胞，荧光显微镜下观察心肌细胞内绿色荧光蛋白的表达，用westernblotting检测Bim蛋白的表达，筛选出沉默效率最高的siRNA用于以下实验。4、将筛选出沉默效率最高的siRNA转染心肌细胞，再进行缺氧处理。实验分为5组：（1）空白对照组；（2）缺氧组；（3）缺氧+脂质体组；（4）缺氧+阴性对照siRNA组；（5）缺氧+Bim-siRNA组。5、倒置显微镜下观察心肌细胞的搏动频率和节律。全自动生化分析仪检测细胞培养液中乳酸脱氢酶(LDH)的含量，用MTT法测定心肌细胞的存活率，流式细胞仪检测细胞凋亡率及钙离子浓度，westernblotting检测细胞Caspase-12、InSP3蛋白的表达。结果：1、心肌细胞缺氧时，唯BH3蛋白Bim缺氧3小时开始升高，12h达到高峰后逐渐回落。2、荧光显微镜发现，转染了阴性对照siRNA的心肌细胞中可观察到绿色荧光，设计的3对siRNA均能有效抑制Bim的表达，其中以siRNA2沉默效率最高,为86.73%。3、缺氧使心肌细胞的搏动频率显著减慢，节律不规则，而抑制Bim的表达能使细胞搏动频率增加。4、缺氧损伤导致细胞培养液中LDH含量较空白对照组明显增加（92.28±11.05VS19.35±4.12，p<0.01），心肌细胞存活率明显下降（67.38±4.02VS100，p<0.05），转染Bim-siRNA后细胞培养液中LDH含量显著减少，细胞存活率较缺氧+阴性对照组升高。5、缺氧导致心肌细胞凋亡率较空白对照组明显增加（42.21±3.43VS2.98±0.72，p<0.01），细胞内钙离子浓度明显增高，而沉默Bim的表达能降低细胞凋亡率和细胞内钙离子浓度。6、缺氧导致内质网应激标志分子Caspase-12、InSP3表达较空白对照组明显上调,分别为（0.84±0.037VS0.15±0.029，p<0.05）和（0.70±0.034VS0.14±0.029,p<0.05），而抑制Bim表达后Caspase-12、InSP3表达明显降低。结论：1、Bim基因在缺氧导致心肌细胞凋亡的过程中发挥重要作用。2、RNA干扰能有效抑制Bim在心肌细胞中的表达。3、沉默Bim的表达能有效抑制缺氧导致心肌细胞凋亡的作用。4、内质网应激标志分子Caspase-12、InSP3可能参与了Bim介导缺氧致心肌细胞凋亡的过程。