【摘 要】
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嵌合抗原受体重定向 T 淋巴细胞(Chimeric antigen receptor redirected T cells,CAR-T cells)在恶性B淋巴细胞瘤治疗上取得了显著成效,在临床试验中取得了很高的缓解率并有
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嵌合抗原受体重定向 T 淋巴细胞(Chimeric antigen receptor redirected T cells,CAR-T cells)在恶性B淋巴细胞瘤治疗上取得了显著成效,在临床试验中取得了很高的缓解率并有部分通过了美国FDA的认证。随着临床试验规模扩大,CAR-T治疗也在其他血液瘤和实体瘤上开展,针对若干类型的恶性肿瘤治疗方面展现了相当的潜力。CAR-T治疗是通过将病人自身PBMC分离,经过适当的基因编辑手段表达CAR结构,令T细胞获得靶向肿瘤细胞的能力,经过扩增后输回自体完成对肿瘤细胞的杀伤。常规的病毒转导需要繁琐的步骤制备临床用的重组病毒,成本也比较高。电转的方式成本低廉操作方便,但该法制备CAR-T细胞的得率和效率通常不高,需要依靠人工抗原呈递细胞(Aartificial antigene presenting cells,aAPC)细胞进行多轮定向扩增。因此,更加需求一种便捷高效低成本的转染方法。本课题优化了一个用新鲜PBMC制备CAR-T细胞的电转方法。包括在冰浴条件下以极高电压将含有Sleeping beauty转座子/转座酶系统的质粒转染进PBMC内,表达CD19-CAR,并添加特定细胞因子进行增殖。增殖过后的CAR-T细胞能够整合并表达目的CAR基因,并且在与靶细胞混合培养后,能够表现出与通过慢病毒制备的CD19-CAR相似的细胞活性和毒性。最终,我们确定了一套基于Sleeping beauty转座子/转座酶和电转的系统性方法制备CAR-T细胞,为在临床环境下进行CAR-T治疗试验提供了替代方法。
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