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目的 颈动脉内膜剥脱术、心跳骤停、急性创伤性休克等病人均潜在有脑缺血的可能，理想的脑保护措施一直是临床医生追求的目标。异氟醚由于其良好的可控性在临床麻醉工作中被广泛采用，有文献报道异氟醚虽然可能增加脑血流和颅内压，但可以通过降低脑代谢明显改善不完全性脑缺血神经预后，与低温有相似的阻止神经元死亡作用，但也有报道认为异氟醚虽延迟但并无明显减少梗死灶作用，异氟醚的脑保护作用尚有争议。本研究拟通过神经电生理学-神经病理学-分子神经生物学-功能行为学等多个层面，在整体上观察大鼠局灶性脑缺血再灌注期间脑功能行为、梗死体积、皮质海马氨基酸含量变化及异氟醚的保护作用；在离体海马脑片观察缺氧无糖损伤和异氟醚应用对细胞外液氨基酸含量和细胞外群峰电位影响及其可能作用机制。 材料和方法 1整体局灶性脑缺血再灌注损伤实验 1．1局灶性脑缺血再灌注损伤模型及实验分组 选择雄性SD大鼠，体重280～320g，腹腔注射40mg／kg戊巴比妥钠麻醉，应用Longa线栓法大脑中动脉栓塞(Middle Cerebral Artery，Occlusion，MCAO)模型，于近心端结扎左侧颈总和颈外动脉，血管夹夹闭颈总动脉远端，在颈总动脉上剪一小口，选择直径0.25～0.30mm、长度不低于4cm的尼龙线，头端用酒精灯烧制成光滑球形，边松血管夹，边进线，一般置入颈内动脉20～22mm，直到有轻微阻力感不能再进为止，手术插线深度小于10mm者剔除，阻闭120min后抽出尼龙线，恢复再灌注。术中持续监测鼓膜温度并用烤灯维持脑温37℃～38℃，随机将动物分为四组，假手术组（1组入仅分离血管，不留置线栓；脑缺血组（皿组厂缺血前吸人纯氧30分钟行线栓阻闭，阻闭120分钟后将线栓抽出恢复再灌注；0．8 MAC异氟醚组（皿组）和 l．3 MAC异氟醚组（W组卜分别在缺血前吸人0．SMAC和1．3MAC异氟醚30min。 1．2观察指标 评估脑缺血再灌注后3h上2h＊0h神经功能损害程度；分别记录缺血前后及再灌注不同时间内定量脑电图（qUantitative electroen－cephalograln，qEEG）和脑温变化情况；用 hC法测定脑缺血 Zh再灌注 22h和70h后梗死体积及光、电镜变化；分别在脑缺血前，脑缺血后30为0。120ndn，再灌注后 60ndn取额顶部皮质和海马组织，用高效液相色谱ui吵－Pe咖rmance li叩d chromatograPhy，HPLC）测定兴奋性氨基酸（excitory a－ndno acid，EAA）和抑制性氨基酸Onhibitory amino acid，IAA）含量；在再灌注后22h经左心室升主动脉快速灌注0．9％生理盐水和4％多聚甲醛，将视交叉后脑组织置4℃相同固定液固定24－48h，用15％和30％蔗糖脱水，冰冻连续冠状切片，片厚32pm，用ABC法进行Bcl－2／Bax免疫组织化学染色。 2离体海马脑片实验 L且海马脑片缺氧无糖损伤（DOG）模型 选用雄性SD大白鼠，体重50－609，在撇麻醉下迅速断头取脑，置于 0－4t经 95％O。／5％CO。混合气体饱和的人工脑脊液（ACSF）中，剥离海马，用振动切片机沿矢状面切片，厚度 400pm。将海马脑片置于 32．0。0．5℃的 ACSF中孵育 Zh，并不断通人 95％O。／5％CO。混合气体。缺氧无糖时脑片置于无糖 ACSF中持续通人95％N。／5％CO。混合气体。 2．2海马脑片孵育液氨基酸测定 取6张孵育Zh后脑片，放于装有3毫升无氧uaO。d0mmHg）无糖 ACSF的玻璃杯中，随机分四组，二组：对照i，持续于含糖 ACSF中gA 95％O。／5％CO。混合气体；见组：37t缺氧无糖组，缺氧无糖 30min复氧供糖 lh；皿组／％异氟醚缺氧组，缺氧无糖同时吸人 1％异氟醚＊组：2％异氟醚缺氧组，缺氧无糖同时吸人 2％异氟醚。在缺氧无糖结束即时（A入复氧供糖30ndn门）和60ndn（）留取ACSF毫升，用HPLC测定氨基酸含量。 2．3海马脑片电生理 孵育 Zh后脑片浸于 37 to．st恒温灌流槽内，双极刺激电极置于海马CAI区的Schaffer侧支路径上，刺激强度为0．2－0． ·2·SInA，玻璃微电极（内充4moUL NaCI溶液，阻抗2－10 Mfl）置于 CAI区锥体细胞层，记录电刺激诱发的OPSc；门）随机将海马脑片分四组，互组：对照组，具体又分对照A组、对照B组和对照C组，分别观察不缺氧1．5小时。吸人 1％和 2％异氟醚 28分钟后 111时 OPS幅度的变化；11组：缺氧无糖组，缺氧无糖 14min复氧供糖；皿组和＊组分别在缺氧无糖前14分钟给予 ltyo或2％异氟醚预先饱和的ACSF，一直保持到缺氧无糖结束，而后恢复供氧供糖。观察缺氧复氧期间顺向群锋电位k populahon spike，OPS）和缺氧损伤电位（hyPoalc inj吧 Potential，HIP）变化。（2）谷氨酸（咖ta－mate，Gin）阳性对照组用含ZnunliL Gin的 ACSF灌流脑片，14分钟后去除GI几2％异氟醚组在使用Gin前14分钟至去除Gi后14分钟持续吸人2％异氟醚，观察去除0U后OPS的恢复情况。 3统计学处理所有实验数据以均数土标准差口扔）表示，用SS统计软件分析资料，HIP出现率与OPS恢复率用Fisher确切概率法，其余的用单因素方差分析和两样本均数比较的 t?