目的:1.研究二甲双胍(Metformin)对血管平滑肌细胞(Vascular smooth muscle cells,VSMCs)功能的影响。2.明确Nur77和二甲双胍抑制VSMCs增殖和迁移及血管重塑之间的联系。3.探讨其所涉及到的信号通路,为二甲双胍在心血管疾病治疗中的应用提供理论依据。方法:1.体外实验中,用不同浓度的二甲双胍来处理大鼠的VSMCs,运用CCK-8实验和VSMCs划痕实验观察在加入二甲双胍不同时间后VSMCs的迁移和增殖的变化,运用蛋白质印迹法(Western blot,WB)和实时荧光定量PCR(Quantitative Real-time PCR,qRT-PCR)检测 Nur77、TET2 和 Calponin 等相关基因的表达与二甲双胍的浓度和时间关系。构建沉默TET2和Nur77的VSMCs,运用qRT-PCR和WB检测Nur77及MMP-9的表达。2.在体实验中,将健康的SD大鼠随机分为3组:包括对照组(Control,Con)、损伤组(Intimal injury,Ⅱ)及损伤+二甲双胍组(Intimal injury+Metformin,ⅡM)。用冠状动脉扩张球囊损伤颈总动脉血管,然后按300mg/kg/d的二甲双胍对ⅡM组进行灌胃,Con组和Ⅱ组仅进行灌胃操作而不加入二甲双胍。21d后取各组颈总动脉损伤段血管(对照组取与损伤段同部位处的颈总动脉血管),运用苏木精-伊红染色法(hematoxylin-eosin staining,HE)在显微镜下观察血管形态结构,计算新生内膜-中膜的厚度及面积和新生内膜面积与中膜面积之比来综合评价损伤的程度,运用免疫组织化学染色法检测Ⅱ组和ⅡM组中Nur77、PCNA、Calponin和a-SMA的表达。结果:1.在细胞实验中,CCK-8实验和VSMCs划痕实验的数据表明二甲双胍可以明显抑制VSMCs的增殖和迁移,并呈现浓度和时间依赖性。WB和qRT-PCR的实验结果可以看出,二甲双胍可以促进TET2、Nur77和Calponin的表达。沉默TET2的VSMCs后,Nur77的表达也随之降低,在沉默Nur77的VSMCs,MMP-9的表达显著上升,从这些数据上来看,二甲双胍可以增加TET2和Nur77的表达,调控VSMCs的表型转换从而抑制VSMCs的增殖和迁移。2.在动物模型中,HE染色发现,ⅡM和Ⅱ组的损伤程度要明显高于Con组。而ⅡM组与损伤Ⅱ组相比较,可以观察到二甲双胍可显著降低颈总动脉内膜-中膜厚度及面积,前者的损伤程度明显低于后者。免疫组织化学染色法的结果显示,与Ⅱ组相比,ⅡM组中Nur77、a-SMA和Caplonin的表达升高,而PCNA表达降低。结论:1.二甲双胍能够调控 TET2、Nur77、MMP-9、Calponin、a-SMA 和 PCNA 的表达,从而调节VSMCs表型转化,调控VSMCs的增殖、迁移和血管重塑。2.TET2、Nur77在血管重塑的发生和发展中扮演着重要的角色,推测二甲双胍可以通过二甲双胍-TET2-Nur77信号通路抑制VSMCs的增殖和迁移以及血管重塑。