【摘 要】
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目的:本课题研究旨在探讨过表达的Heparanase对胆囊癌细胞系GBC-SD增殖及PI3K/AKT信号通路的作用。方法:1.构建Heparanase真核表达载体,然后获得转基因过表达Heparanase的胆囊癌细胞株GBD-SD。2.为了研究胆囊癌细胞系GBC-SD和GBD-SD中Heparanase的表达情况,我们通过q RT-PCR和Western blot实验进行比较并分析了胆囊癌细胞系G
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目的:本课题研究旨在探讨过表达的Heparanase对胆囊癌细胞系GBC-SD增殖及PI3K/AKT信号通路的作用。方法:1.构建Heparanase真核表达载体,然后获得转基因过表达Heparanase的胆囊癌细胞株GBD-SD。2.为了研究胆囊癌细胞系GBC-SD和GBD-SD中Heparanase的表达情况,我们通过q RT-PCR和Western blot实验进行比较并分析了胆囊癌细胞系GBC-SD和GBD-SD中Heparanase的m RNA和蛋白表达情况。3.利用MTT法和集落形成实验检测GBC-SD和GBD-SD细胞增殖的情况。4.利用Western blot实验检测Heparanase过表达对PI3K/AKT信号通路相关蛋白（p-PI3K、PI3K、p-AKT和AKT）表达的影响。5.为进一步探索Heparanase是否通过PI3K/AKT信号通路促进GBC-SD细胞的增殖,本研究将PI3K/AKT信号通路抑制剂LY294002（10umol/L）处理GBC-SD细胞2天后,通过MTT法和集落形成实验检测GBC-SD组和LY294002组细胞的增殖情况。结果:1.经成功转染后的GBD-SD组细胞中Heparanase的m RNA和蛋白相对表达量较GBC-SD组明显升高,差异有统计学意义（P＜0.01）。2.与正常表达Heparanase的GBC-SD细胞相比,过表达Heparanase的GBD-SD细胞光密度（OD）值和集落形成能力明显升高,差异有统计学意义（P＜0.05）。3.Western blotting检测结果显示,与对照组GBC-SD细胞相比,GBD-SD组细胞中的p-AKT、p-PI3K蛋白表达明显升高,总AKT和总PI3K水平无明显变化,但p-AKT/AKT值和p-PI3K/PI3K值明显升高,差异有统计学意义（P＜0.01）。4.与对照组GBC-SD细胞相比,LY294002组细胞的增殖能力和p-AKT/AKT值显著降低,差异有统计学意义（P＜0.01）。结论:过表达Heparanase能够促进GBC-SD细胞的增殖,这一效应可能与PI3K/AKT信号通路有关。
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