西洋参多糖结构表征及免疫活性研究

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西洋参(Panax quinquefolium L.)系五加科人参属,是一种药食同源的多年生草本植物。研究表明西洋参多糖对人体的心血管系统、免疫系统、神经系统和内分泌系统等具有独特的药理和广泛的生物调控作用。本研究以西洋参根为原料,采用水提醇沉法制备西洋参粗多糖,利用大孔树脂和聚酰胺柱对其进行初步纯化,采用柱层析法对其进一步分级分离,运用化学和物理方法对多糖的结构进行了初步分析,并通过动物实验对西洋参粗多糖的免疫调节活性进行了研究,主要研究内容和结果如下:(1)西洋参多糖的制备:用95%的乙醇90℃水浴回流,以除去醇溶性杂质,沸水浴回流提取多糖,80%乙醇醇沉,得到西洋参粗多糖,得率为14.97%。(2)西洋参多糖分离纯化:以脱色率、脱蛋白率及多糖损失率为评价指标,采用不同方法对粗多糖液进行脱色脱蛋白试验,研究确定了大孔树脂S-8和聚酰胺柱层析作为西洋参粗多糖初步纯化方法。大孔树脂S-8在动态脱色条件为上样浓度10mg/mL,50mL多糖溶液以2mL/min流速上样,色素脱除率为91.43%,多糖损失率17.82%。聚酰胺柱层析法在上样浓度为10mg/mL,以3mL/min流速上样,吸附平衡30min,蛋白脱除率为97.45%,多糖损失率10.86%。经初步纯化后的多糖溶液通过DEAE SepharoseCL-6B和Sepharose CL-6B进一步分离纯化,分离得到两个中性多糖组分WPS-1和WPS-2,三个酸性多糖组分SPS-1、SPS-2和SPS-3。(3)西洋参多糖结构鉴定:紫外吸收光谱分析表明各多糖组分均不含蛋白质或核酸,高效凝胶色谱(HPGPC)测定中性多糖WPS-1和WPS-2的重均分子量(Mw)为1.54×106Da,1.41×104Da,酸性多糖SPS-1、SPS-2和SPS-3的重均分子量(Mw)分别为3.62×105,9.70×106 Da,5.12×105Da。多糖扫描电镜分析表明:水洗多糖WPS-1呈碎片状和蜂窝片状,WPS-2呈中粒径较大的空心球状、橄榄球状和小碎片状。盐洗多糖SPS-1呈粒径较小的球状、长杆状和柱状;SPS-2呈不规则纤维丝状、丝带状和分枝状;SPS-3呈枯叶状和薄片状且无规则蜷曲。单糖组成分析结果表明,水洗多糖WPS-1由阿拉伯糖、半乳糖和葡萄糖组成,摩尔比为5.2:6.6:20.8;WPS-2由阿拉伯糖、甘露糖、半乳糖和葡萄糖组成,摩尔比3.7:1.2:2.4:3.8:盐洗多糖SPS-1由阿拉伯糖、木糖、甘露糖、半乳糖、葡萄糖和半乳糖醛酸组成,摩尔比为4.2:1.1:1.3:4.5:1.5:4.0;SPS-2由阿拉伯糖、木糖、甘露糖、半乳糖、葡萄糖、半乳糖醛酸和葡萄糖醛酸组成,摩尔比为4.2:1.5:1.9:7.8:7.9:5.7:2.1;SPS-3由阿拉伯糖、木糖、甘露糖、半乳糖、葡萄糖、半乳糖醛酸和葡萄糖糖醛酸,摩尔比5.2:3.0:2.8:1.5:3.4:3.0:6.5:2.3。红外光谱和1H-NMR分析显示纯化多糖均含有吡喃型葡萄糖,且水洗多糖主要有α-构型吡喃型糖环构成,盐洗多糖则α和β-构型的呋喃和吡喃糖环构型共存。(4)西洋参多糖免疫调节活性:试验表明100-200mg/mL剂量的西洋参多糖能显著增强CPA所致免疫低下小鼠单核巨噬细胞的吞噬能力,对小鼠胸腺脾脏、淋巴细胞增殖及血清抗体(溶血素和免疫球蛋白)生成均具有显著的促进作用,表明西洋参多糖能够激活非特异性免疫和特异性免疫,提高机体的细胞免疫和体液免疫功能,具有良好的免疫增强活性。
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