论文部分内容阅读
目的：本研究旨在探讨手掌参醇提物(GymnadeniaconopseaAlcoholExtract，GcAE)对染矽尘大鼠肺组织ⅠⅢ型胶原合成的影响及其抗氧化应激机制。
方法：本研究采用清洁级Wistar大鼠160只，体重200-240克。随机将大鼠分为四组，即对照组、染矽尘组、GcAE组(GcAE，8g·kg-1·d-1)、汉防己甲素(Tetrandrine，TT)组(TT，50mg·kg-1·3d-1)，每组40只。染矽尘组与各治疗组采用气管暴露法每只大鼠气管内注入浓度为50mg/ml的矽尘混悬液1ml，对照组注入0.9％NaCl注射液。模型建立24h后各给药组开始灌胃给药，对照组及染矽尘组给等容生理盐水。给药后，每组分5个时间点(7d、14d、21d、28d、60d)分别取8只大鼠将其处死。血浆中丙二醛(maleicdialdehyde，MDA)、超氧化物歧化酶(superoxidedismutase，SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(glutathioneperoxidase，GSH-PX)测定分别采用南京建成生物工程研究所MDA、SOD和GSH-PX试剂盒。支气管肺泡灌洗液(bronchialalveolarfluid，BALF)中一氧化氮(nitricoxide，NO)、总一氧化氮合酶(nitricoxidesynthase，NOS)、诱导型一氧化氮合酶(induciblenitricoxidesynthase，iNOS)测定采用南京建成生物工程研究所NO、NOS、iNOS试剂盒。HE染色观察大鼠肺组织矽结节。天狼猩红染色法结合偏振光显微镜观察ⅠⅢ型胶原。用组织芯片仪制作组织芯片微阵列，PV二步法检测组织芯片iNOS蛋白的表达情况。用Image-ProPlusVersion4.5forwindowsTM图象分析系统进行定量分析。
结果：1染矽尘组大鼠各时间点肺组织脏器系数均高于对照组，在14d、21d、28d、60d有显著性差异(P＜0.01)。与染矽尘组比较，GcAE组肺组织脏器系数在14d、21d、28d、60d时显著降低(P＜0.05)，TT组在14d、28d、60d时显著降低(P＜0.05)。
2与对照组比较，不同时间点染矽尘组大鼠血浆SOD及GSH-PX活力变化相似：除在7d时略高外，其余各个时间点均降低。SOD在14d、21d、28d、60d显著降低(P＜0.05)，GSH-PX在14d、21d、28d显著降低((P＜0.05)，其中14d时陡然下降到最低(P＜0.01)然后开始缓慢增加。与染矽尘组比较，GcAE组及TT组大鼠血浆SOD及GSH-PX活力从14d开始均不同程度地增高，在14d、21d、28d时有显著性差异(P＜0.05)。
3与对照组比较，染矽尘组大鼠各时间点血浆MDA含量显著升高，其中7d、14d、21d、28d时P＜0.01，60d时P＜0.05。
GcAE组及TT组大鼠各时间点血浆MDA含量均低于染矽尘组，其中7d、14d、21d、28d时有显著性差异(P＜0.05)。
4染矽尘大鼠各时间BALF中总NOS活力均高于对照组，有显著性差异(P＜0.01)，其中14d时达到高峰。与染矽尘组比较，GcAE组及TT组大鼠各时间BALF中总NOS活力均降低，在14d、21d、28d时有显著性差异(P＜0.05)。
5与对照组比较，染矽尘大鼠各时间BALF中iNOS活力显著增加，在14d时增加达到高峰，于7d、14d、21d、28d时有显著性差异(P＜0.05)。与染矽尘组比较，GcAE组及TT组大鼠各时间点BALF中iNOS活力均降低，其中，GcAE组在7d、14d、21d、28d时有显著性差异(P＜0.05)，TT组在14d、21d、28d时有显著性差异(P＜0.05)。
6与对照组比较，染矽尘大鼠各时间点BALF中NO含量增加，其中7d、14d、21d时有显著性差异(P＜0.05)。GcAE组及TT组大鼠各时间点BALF中NO含量较染矽尘组均有所降低，其中7d、14d、21d时有显著性差异(P＜0.05)。
7与对照组比较，染矽尘组大鼠肺组织各时间点iNOS阳性细胞面密度均增加，21d时达到高峰，此后开始下降，7d、14d、21d、28d时有显著性差异(P＜0.05)。GcAE组及TT组大鼠肺组织各时间点iNOS阳性细胞面密度均低于染矽尘组，在14d、21d时有显著性差异(P＜0.05)。
8与对照组比较，Ⅰ型胶原呈直线上升趋势，在各个时间点均有显著性差异(P＜0.05)，而Ⅲ型胶原在21d时上升陡然趋缓，仅在7d、14d、21d时有显著性差异(P＜0.05)。GcAE及TT对各时间点染矽尘大鼠肺组织ⅠⅢ型胶原的增加均有抑制作用，与染矽尘组比较，对于Ⅰ型胶原在各时间点均有显著性差异(P＜0.05)，对于Ⅲ型胶原在14d、21d时有显著性差异(P＜0.05)。
结论：本研究发现GcAE可以通过减轻肺的氧化应激和脂质过氧化来抑制矽尘造成的肺组织Ⅰ、Ⅲ型胶原合成，从而抑制矽肺纤维化的发展。