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子宫内膜癌(Endometrial cancer,EC)是女性生殖系统最常见的恶性肿瘤之一,在西方发达国家中居首位,发病率居高不下,发病人数持续增长,但具体发病原因及作用机制有待进一步研究明确。流行病学调查分析结果显示肥胖或超重、2型糖尿病、高血压、多囊卵巢综合征(Polycystic ovary syndrome,PCOS)等代谢综合征(Metabolic syndrome,MS)相关性疾病均为子宫内膜癌发病的高危因素。MS是机体代谢异常引起的一系列症候群的统称,主要表现为中心性肥胖、高血压、血脂异常、高血糖等,胰岛素抵抗以及因而继发的高胰岛素血症是MS的主要病理生理基础,MS不仅是导致心血管疾病的高危因素,也与多种肿瘤的发生及肿瘤相关的死亡密切相关。脂肪组织分泌的多种脂肪因子均与肿瘤的发生相关,内脂素作为脂肪因子家族的新成员,在多种MS相关性肿瘤中高表达,作为MS和肿瘤的连接点被广泛重视。课题组前期研究发现内脂素及胰岛素均与子宫内膜癌的发生发展相关,但二者之间是否具有协同作用尚未明确。本课题将通过体内外实验探讨内脂素与胰岛素对子宫内膜癌细胞及裸鼠移植瘤的影响是否发挥协同作用并通过对相关信号通路蛋白的检测探讨可能的作用机制。第一部分内脂素与胰岛素对子宫内膜癌细胞的生物学行为的影响目的:探讨内脂素与胰岛素对子宫内膜癌细胞增殖、凋亡及迁移侵袭的作用。方法:采用CCK-8试剂盒检测内脂素与胰岛素对子宫内膜癌Ishikawa及KLE细胞增殖的影响;流式细胞仪检测内脂素与胰岛素对子宫内膜癌Ishikawa及KLE细胞周期及凋亡的影响;Transwell小室检测内脂素与胰岛素对子宫内膜癌Ishikawa及KLE细胞细胞迁移及侵袭的影响。结果:与对照组相比,内脂素及胰岛素单独作用于Ishikawa及KLE细胞能够促进细胞增殖、促进细胞G1/S期进展、抑制细胞凋亡、促进细胞迁移侵袭(P<0.05);内脂素与胰岛素联合处理组与内脂素或胰岛素单独处理组相比,其促进增殖及周期进展、抑制细胞凋亡、促进细胞迁移侵袭的作用更加明显(P<0.05)。结论:内脂素与胰岛素均能促进子宫内膜癌细胞的增殖、抑制细胞凋亡、促进细胞迁移及侵袭,且具有协同作用,共同促进子宫内膜癌细胞的恶性进展。第二部分内脂素通过PI3K/Akt及MAPK/ERK1/2通路促进子宫内膜癌恶性进展及其与胰岛素的协同作用目的:探讨内脂素促进子宫内膜癌恶性进展的分子机制及与胰岛素的协同作用。方法:采用Western Blot方法检测内脂素与胰岛素单独作用及联合作用对Ishikawa及KLE细胞PI3K、MAPK信号通路相关蛋白Ins R、p-Ins R、IRS1、p-IRS1、IRS2、p-IRS2以及Akt、p-Akt、ERK1/2、p-ERK1/2的表达情况的影响;CCK8检测内脂素对Ins R下调后的子宫内膜癌Ishikawa及KLE细胞增殖的影响;流式细胞仪检测内脂素对Ins R下调后的子宫内膜癌Ishikawa及KLE细胞周期的影响;Ishikawa细胞转染带有flag标签的内脂素过表达慢病毒,免疫共沉淀检测内脂素是否通过与Ins R结合发挥作用。结果:内脂素及胰岛素均能促进Ins R、IRS1及IRS2蛋白的磷酸化进一步激活其下游的PI3K/Akt及MAPK/ERK1/2信号通路,促进p-Akt、p-ERK1/2蛋白的表达,且二者对信号通路相关蛋白的激活具有协同作用;下调Ishikawa及KLE细胞Ins R的表达后,内脂素对细胞的促增殖及周期进展的作用有受抑制的趋势,与阴性对照组相比,无统计学差异(P>0.05);免疫共沉淀并未发现内脂素与Ins R结合的证据。结论:内脂素促进子宫内膜癌细胞胰岛素通路及下游PI3K/Akt及MAPK/ERK1/2信号通路的活化,且与胰岛素具有协同作用。第三部分内脂素与胰岛素对子宫内膜癌细胞裸鼠移植瘤的影响目的:探讨FK866、内脂素与胰岛素对子宫内膜癌细胞裸鼠移植瘤的作用。方法:通过皮下注射Ishikawa细胞构建裸鼠移植瘤模型,观察经外源性FK866、内脂素及胰岛素刺激后裸鼠移植瘤生长情况的变化;ELISA方法检测裸鼠血清内脂素水平;免疫组织化学方法检测不同处理组裸鼠皮下移植瘤组织VISFATIN及Ki-67的表达情况。结果:内脂素能够促进裸鼠移植瘤的生长,FK866对裸鼠移植瘤的生长具有抑制作用;内脂素与胰岛素共同作用组裸鼠移植瘤体积及肿瘤重量均高于内脂素或胰岛素单独作用组,差异具有统计学意义(P<0.05);内脂素组裸鼠血清内脂素水平明显高于对照组及FK866组,差异具有统计学意义(P<0.05);免疫组化结果显示VISFATIN在肿瘤组织中均呈阳性表达,内脂素单独作用组及内脂素与胰岛素共同作用组VISFATIN呈高表达,对照组及胰岛素单独作用组VISFATIN表达相对较低,FK866组VISFATIN表达低于对照组;FK866组Ki-67阳性指数低于对照组,内脂素与胰岛素联合作用组Ki-67的阳性指数最高,高于内脂素或胰岛素单独作用组。结论:内脂素与胰岛素均能促进裸鼠皮下移植瘤的生长,且二者具有协同作用。FK866能够抑制裸鼠移植瘤的生长,其可能为以内脂素为靶点的肿瘤治疗提供新思路。