腹腔热灌注化疗促进卵巢癌细胞凋亡及机制研究

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卵巢癌是女性生殖系统三大恶性肿瘤之一,在妇科恶性肿瘤中死亡率最高。多数卵巢癌患者初次就诊时已经是Ⅲ期或者Ⅳ期,手术后辅助紫杉醇等静脉化疗,能暂时得到缓解,但很快复发。其中微小病灶残留腹腔是术后肿瘤复发的主要原因,腹腔热灌注化疗(Hyperthermic Intraperitoneal Intraoperative Chemotherapy,HIPEC)为这些微小残留病灶提供了一种有效的治疗方案。在本研究中,通过对广州医科大学附属肿瘤医院的上皮性卵巢癌病例进行回顾性分析,我们发现腹腔热灌注化疗,能明显延长患者的总生存时间。用顺铂联合43℃热疗处理卵巢癌A2780、OVCAR-3细胞,发现P16,P21明显上调,而CyclinD1,CDK4则显著下调,导致细胞周期显著阻滞;同时Bax/Bcl-2比例显著上升,促进了细胞凋亡。
  研究目的:
  1、明确腹腔热灌注化疗对减瘤术后卵巢癌患者总生存时间的影响;
  2、探究顺铂联合43℃热疗对卵巢癌细胞A2780、OVCAR-3的影响及作用机制。
  方法与结果
  1、腹腔热灌注化疗能延长上皮性卵巢癌患者的总生存时间
  方法:将2009年1月至2016年8月在广州医科大学附属肿瘤医院接受治疗的55例上皮性卵巢癌患者,分为对照组(手术组)和HIPEC组(手术+HIPEC组),所有患者都接受了静脉化疗,随访统计后,采用SPPSS19.0以Kaplan-Meier法分析并比较两组患者总生存时间的差异,组间差异采用Log-rank法检测。
  结果:HIPEC+手术组上皮性卵巢癌患者与只行手术治疗的患者相比,术后中位生存时间延长15.1个月(P<0.05)。腹腔热灌注化疗能显著延长患者的总生存时间。
  2、顺铂联合43℃热疗能阻滞卵巢癌A2780、OVCAR-3细胞周期,并促进其凋亡
  方法:实验分为对照组、化疗组(顺铂)、热疗组(43℃)和热化疗组(顺铂+43℃热疗)。CCK-8检测细胞活性,并计算顺铂在卵巢癌细胞株A2780和OVCAR-3中的IC50;AO/GV双染观察凋亡细胞;流式检测细胞凋亡和周期。
  结果:顺铂在A2780细胞和OVCAR-3细胞中的IC50分别为1.67μM/L和1μM/L。AO/GV双染发现,在化疗组和热疗组凋亡细胞较对照组增多,热化疗组最明显;流式结果示顺铂组、热疗组与对照组比凋亡比例均增多(P<0.05),其中热化疗组凋亡细胞比率均最大(P<0.001);化疗组、热疗组与对照组比G1期细胞增多,S期细胞减少(P<0.05),且热化疗组中停滞于G1期的细胞增多最明显(P<0.01)。
  3、顺铂联合43℃热疗对卵巢癌A2780、OVCAR-3细胞作用机制的初步探究
  方法:qPCR,Westernblot分别从转录水平和蛋白质水平检测凋亡、周期相关基因的表达。
  结果:卵巢癌细胞株A2780和OVCAR-3中促进凋亡的基因CASPASE3、CASPASE8和CASPASE9的切割带、BAX、BAK和BID的表达量在热化疗组较其他组显著升高(P<0.05),凋亡抑制基因BCL-2、BCL-XL、MCL-1和c-FLIP在热化疗组的表达量较其他组显著降低(P<0.05)。热化疗组与对照组、热疗组、化疗组相比,Bax、切割的Caspase9和Caspase3表达增多,Bcl-2表达减少;P16、P21表达增多,CyclinD1、CDK4表达减少。
  结论:
  1、腹腔热灌注化疗能延长术后卵巢癌患者的总生存时间(p<0.05)。
  2、顺铂联合43℃热疗能阻滞卵巢细胞A2780和OVCAR-3的细胞周期。
  3、顺铂联合43℃热疗明显促进细胞凋亡。
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