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目的观察同型半胱氨酸(Hcy)对小鼠肺微血管内皮细胞(PMVEC)功能紊乱的影响,探讨RASAL1在Hcy致肺微血管内皮细胞功能紊乱中的作用及机制。方法实验对象为离体小鼠肺微血管内皮细胞。将细胞分为空对照组(0μmol/L Hcy,control)和Hcy刺激组(100μmol/L Hcy,Hcy),刺激24h。蛋白印迹法(Western blot)检测内皮型一氧化氮合酶(eNOS)的蛋白表达,免疫荧光法检测细胞纤维状肌动蛋白(F-actin)的相对表达水平,采用超氧化物歧化酶(SOD)检测试剂盒检测SOD的相对表达量,同时,用Western blot检测Ras三磷酸鸟苷酶激活样蛋白-1(RASAL1)的蛋白表达。将RASAL1干扰和过表达腺病毒转染PMVECs,并用Hcy干预(100μmol/L Hcy+干扰/过表达腺病毒,sh/ad-RASAL1+H),Western blot检测p38(p38MAPK)、P-p38、MLCK及eNOS的蛋白表达,免疫荧光法检测细胞内F-actin的形态变化,采用SOD检测试剂盒检测SOD的相对表达量。在Hcy干预的基础上,用p38干扰片段干扰和过表达腺病毒转染PMVECs(100μmol/L Hcy+小干扰片段干扰/过表达腺病毒,siRNA/Ad-p38+H),Western blot检测p38、P-p38及eNOS的蛋白表达,免疫荧光法检测细胞内F-actin的形态变化,采用SOD检测试剂盒检测SOD的相对表达量。结果1.与对照组相比较,Hcy刺激组的eNOS表达降低,SOD的含量降低,差异有统计学意义(P<0.05),免疫荧光法检测F-actin的骨架形态出现断裂,皱缩,有丝状样。2.Hcy刺激组中RASAL1表达低于对照组(P<0.05);Hcy刺激组的eNOS与SOD表达低于对照组(P<0.05);RASAL1过表达组的eNOS与SOD表达高于Hcy组(P<0.05);RASAL1干扰组中F-actin的部分骨架不完整,边缘出现断裂;RASAL1过表达组中F-actin的骨架完整,疏松。3.与对照组相比,Hcy刺激组的p38磷酸化水平与MLCK表达升高(P<0.05);与Hcy组相比RASAL1过表达组的p38磷酸化水平与MLCK表达降低(P<0.05);干扰p38的表达后,eNOS蛋白表达升高(P<0.05),F-actin的骨架改完整;过表达p38的表达后F-actin的部分骨架收缩,断裂。结论Hcy导致肺微血管内皮功能紊乱,且RASAL1参与了此过程,RASAL1-MAPK-MLCK信号通路可能在Hcy致肺内皮功能紊乱中发挥了重要作用。