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第一章异氟醚预处理延迟相对缺血再灌注兔心肌损伤的保护作用目的:建立缺血再灌注模型,观察异氟醚预处理延迟相对兔心肌的保护作用。方法:健康新西兰大白兔随机分成4组:1组:假手术组,仅开胸并分离冠状动脉左前降支,但不阻断血流160分钟;2组:缺血再灌注组,行冠状动脉左前降支阻断40分钟,再灌注120分钟;3组:1.0%异氟醚预处理组,予以1.0%异氟醚+100%氧气持续吸入2小时后停止吸入异氟醚,于24小时后同2组处理;4组:2.0%异氟醚预处理组,予以2.0%异氟醚+100%氧气持续吸入2小时后停止吸入异氟醚,于24小时后同2组处理。2组、3组和4组分别于阻断前(T1)、阻断20分钟(T2)、阻断40分钟(T3)、再灌注60分钟(T4)和再灌注120分钟(T5)五个时点取颈内动脉血测定肌钙蛋白(cTnI)、乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸磷酸激酶(CK)浓度。再灌注结束后观察心肌超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量,伊文思蓝和TTC染色法测心梗面积,电镜观察各组心肌细胞超微结构变化。结果:1.心肌酶变化:与1组比,2组、3组和4组血清cTnI、LDH、CK从T2至T5均较T1有升高(P＜0.05),但3组和4组增高程度低于2组(P＜0.05),4组又较3组低。2.心肌梗死面积:3组(24.2%±2.1%)和4组(19.7%±2.8%)低于2组(37.8%±1.7%)(P＜0.05)。3.心肌超微结构变化:电镜显示预处理组心肌细胞损伤轻于对照组。4.生化指标变化:与1组比,2组、3组和4组血清MDA和SOD均升高(P＜0.05),但与2组比,3组和4组MDA降低(P＜0.05),SOD增高(P＜0.05)。结论:异氟醚预处理延迟相对缺血再灌注兔心肌损伤有保护作用。第二章异氟醚预处理延迟相对兔心肌保护作用的信号传导机制目的:建立缺血再灌注模型,观察异氟醚预处理延迟相对兔心肌的保护作用的信号传导机制。方法:健康新西兰大白兔随机分成5组:1组:假手术组,仅开胸并分离冠状动脉左前降支,但不阻断血流160分钟;2组:缺血再灌注组,行冠状动脉左前降支阻断40分钟,再灌注120分钟;3组:2.0%异氟醚预处理组,予以2.0%异氟醚+100%氧气持续吸入2小时后停止吸入异氟醚,于24小时后同2组处理;4组:2.0%异氟醚预处理+P38 MAPK阻断剂(SB203580)组,在吸入异氟醚前10min,静注SB203580(1mg/kg),其它同3组处理;5组:2.0%异氟醚预处理+阿片类受体阻断剂(纳络酮)组,在吸入异氟醚前10min,静注纳络酮(6mg/kg),其它同3组处理。再灌注结束后伊文思蓝和TTC染色法测心梗面积,免疫印记法(Western Blot)测各组心肌p38MAPK、NF-κB、Bcl-2和Caspase-3表达。结果:1.心肌梗死面积:3组(19.7%±2.8%)和4组(21.3%±3.5%)较2组(37.8%±1.7%)有显著性差别(P＜0.05),5组(39.2%±2.1%)较2组无显著性差别(P＞0.05)。2.各组心肌p38MAPK蛋白表达变化:3组和4组p38MAPK的表达明显低于2组(P＜0.05),5组则与2组无显著性差异(P＞0.05)。3.各组心肌NF-κB蛋白表达变化:3组和4组NF-κB的表达明显低于2组(P＜0.05),5组则与2组无显著性差异(P＞0.05)。4.各组心肌Bcl-2蛋白表达变化:3组和4组Bcl-2的表达明显高于2组(P＜0.05),5组则与2组无显著性差异(P＞0.05)。5,各组心肌Caspase-3蛋白表达变化:3组和4组Caspase-3的表达明显低于2组(P＜0.05),5组则与2组无显著性差异(P＞0.05)。结论:异氟醚预处理延迟相通过阿片类受体介导,下调心肌p38MAPK、NF-κB和Caspase-3蛋白表达,上调Bcl-2蛋白表达,对缺血再灌注兔心肌产生保护作用。第三章异氟醚预处理延迟相对缺血再灌注兔心肌蛋白质组学的研究目的:采用蛋白质组学技术探讨异氟醚预处理延迟相对心肌缺血再灌注损伤保护作用的分子机制。方法:6只新西兰大白兔随机分为缺血再灌注组和异氟醚预处理延迟相组,建立缺血再灌注模型(左冠前降支结扎40min,再灌注120min),异氟醚预处理组在结扎前24h时接受吸入2.0%异氟醚预处理,再灌注结束后,应用双向凝胶电泳技术分离缺血再灌注组和心肌异氟醚预处理延迟相组兔心肌总蛋白质。结果:经凝胶图像分析找到的差异蛋白质13个,基质辅助激光解析一电离飞行时间质谱对差异蛋白进行鉴定,共鉴定出11个蛋白质。这些蛋白质包括应激反应蛋白、代谢相关蛋白、信号调节蛋白、结构蛋白等。结论:这些差异蛋白可能通过其分子伴侣功能、清除自由基、改善能量代谢等发挥异氟醚预处理延迟相的心肌保护作用。第四章热休克蛋白介导异氟醚预处理延迟相对缺血再灌注兔心肌保护作用的机制目的:建立缺血再灌注模型,观察热休克蛋白参与异氟醚预处理延迟相对缺血再灌注心肌保护作用的机制。方法:健康新西兰大白兔随机分成5组:1组:假手术组,仅开胸并分离冠状动脉左前降支,但不阻断血流160分钟;2组:缺血再灌注组,行冠状动脉左前降支阻断40分钟,再灌注120分钟;3组:2.0%异氟醚预处理组,予以2.0%异氟醚+100%氧气持续吸入2惺焙笸Ｖ刮胍旆?于24小时后同2组处理;4组:2.0%异氟醚预处理+P38 MAPK阻断剂(SB203580)组,在吸入异氟醚前10min,静注SB203580(1mg/kg),其它同3组处理;5组:2.0%异氟醚预处理+阿片类受体阻断剂(纳络酮)组,在吸入异氟醚前10min,静注纳络酮(6mg/kg),其它同3组处理。再灌注结束后伊文思蓝和TTC染色法测心梗面积,免疫印记法(Western Blot)测各组心肌a B-Crystallin和HSP27表达。结果:1.心肌梗死面积:3组(19.7%±2.8%)和4组(21.3%±3.5%)较2组(37.8%±1.7%)有显著性差别(P＜0.05),5组(39.2%±2.1%)较2组无显著性差别(P＞0.05)。2.各组心肌a B-Crystallin和HSP27蛋白表达变化:3组和4组a B-Crystallin和HSP27的表达明显低于2组(P＜0.05),5组则与2组无显著性差异(P＞0.05)。结论:异氟醚预处理延迟相通过a B-Crystallin和HSP27介导对缺血再灌注兔心肌的保护作用。