WGA、RCA-I和ECL凝集素受体在过量维甲酸致昆明小鼠腭裂发生中的作用

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目的:腭裂是发病率较高的一种先天性颌面部发育缺陷,一般认为,它的病因为基因和环境因素的联合作用。腭的形成是一个极其复杂的生物学过程,受到诸多基因及调节因子的的严密调控,其中任何调节因子及相关基因的表达异常,都可能导致腭裂的发生。凝集素受体即是这些调节因子中的一员。   凝集素受体是一类分布于细胞膜表面的糖蛋白、糖脂等糖复合物。凝集素受体上具有能被凝集素特异识别并结合的糖基。它们在细胞的生长、分化、细胞之间的黏附及相互识别中起重要作用。维甲酸(RA)是维生素A在体内的自然活性代谢物,也是胚胎发育过程中不可缺少的形态发生素。在小鼠腭组织发育敏感期,RA可诱发子代发生腭裂。本研究以昆明小鼠为研究对象,在RA致小鼠腭裂畸形动物模型上,利用亲和细胞化学法探讨麦胚凝集素(wheat germagglutinin,WGA)、蓖麻凝集素(ricinus communis agglutinin,RCA-I)和鸡冠珊瑚树凝集素(erythrina cristagalii lectin,ECL)三种受体在RA致胚胎腭裂畸形发生中的表达状况和变化规律,以期阐明上述三种凝集素受体在过量RA致腭裂的发生机制,为腭裂的预防与治疗提供实验依据。   方法:⑴RA致昆明小鼠腭裂畸形动物模型的建立:下午六时,昆明小鼠雌雄2:1合笼,次日早上阴栓阳性雌鼠定为孕0天(gestation day0,GDO)。孕鼠随机分为实验组和对照组。实验组于GD10,一次性灌服RA芝麻油悬浮液,剂量为80mg/kg,对照组于相同时间一次性灌服等量芝麻油。⑵麦胚凝集素(WGA)受体、蓖麻凝集素(RCA-I)受体及鸡冠珊瑚树凝集素(ECL)受体的检测:实验组和对照组孕鼠各随机分为8小组,分别于GD138、GD1314、GD1322、GD148、GD1414、GD1422、GD158和GD1522等8个时间点剖宫取胚,常规石蜡切片。采用亲和细胞化学法检测WGA受体、RCA-I受体和ECL受体在各组不同时点腭板上皮和间充质中的表达和分布状况。   结果:①WGA受体亲和组织化学染色结果:在正常对照和实验各组的腭板上皮及其间充质中WGA均有不同程度的表达。图象分析结果显示,伴随胚胎发育,WGA在对照组腭板上皮中的表达量呈现先逐渐上升(GD138~GD1322),而后逐渐下降(GD1322~GD1522)的趋势。其峰值出现于GD1322时。在实验组,其表达量则呈逐渐下降的趋势。除GD138时明显高于对照组(P<0.05),GD1314和GD1522时与对照组无显著性差异外,其余各时间点均明显低于相应对照组(P<0.05,P<0.01)。无论在对照组还是在实验组,WGA在间充质中的表达量均明显低于在腭板上皮中的表达量。无论在对照组和实验组,WGA在间充质中的表达量均呈现逐渐下降的趋势,在各个时间点上,实验组和对照组的表达量之间均无显著性差异(P>0.05)。②RCA-I受体亲和组织化学染色结果:在正常对照组和实验组腭板上皮和间充质中,RCA-I也均有不同程度的表达。图象分析结果显示,伴随胚胎发育,RCA-I在对照组腭板上皮中的表达量呈现逐渐上升的趋势,其峰值出现于GD158时。在实验组,伴随胚胎发育,RCA-I表达量的波动较大,但其总趋势与对照组大体相仿。除GD138和GD1414外,实验组腭板上皮中RCA-I的表达量均显著低于相应对照组(P<0.05,P<0.01)。在对照组和实验组,RCA-I在间充质中的表达量均明显低于在腭板上皮中的表达量;而且均呈现先下降而后逐渐上升的趋势,但在各个时间点上,实验组和对照组之间均无显著性差异(P>0.05)。③ECL受体亲和组织化学染色结果:在正常对照组和实验组腭板上皮和间充质中,ECL均有不同程度的表达。图象分析结果显示,伴随胚胎发育,ECL在对照组腭板上皮中的表达量呈现先逐渐上升(GD138~GD1322),而后逐渐下降(GD1322~GD1414),最后又大幅上升(GD1414~GD1522)的趋势。在实验组腭板上皮,其变化趋势与对照组大体相仿,在各个时间点,其表达量均显著低于相应对照组(P<0.05,P<0.01)。在对照组和实验组ECL在间充质中的表达量均明显低于在腭板上皮中的表达量,两者的走势均无明显规律性;在各个时间点上,两组间均无显著性差异(P>0.05)。   结论:⑴在腭的正常发育过程中,WGA、RCA-I、ECL三种凝集素受体的表达均呈现规律性的变化,但趋势存在明显差异。它们可能参与对腭板发育的调节。⑵WGA、RCA-I、ECL三种凝集素受体在腭板上皮中表达水平的下降可能与过量RA致小鼠腭裂畸形发生相关。
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