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目的:探讨肌球蛋白1d(Myosin1d)对自噬溶酶体形成的影响及其作用机制。方法:(1)在大鼠肾细胞(Normal rat kidney,NRK)中,免疫荧光及Apex-透射电镜观察细胞内Myosin1d蛋白与自噬体的定位,免疫共沉淀(CO-immunoprecipitation,CO-IP)观察Myosin1d与自噬相关蛋白的相互作用;(2)应用CRISPR/Cas9技术敲除Myosin1d基因,建立Myosin1d-KO细胞,蛋白质免疫印迹(Western blotting,WB)检测自噬底物蛋白P62表达水平的变化;(3)在Myosin1d敲除的细胞中利用免疫荧光观察LC3与溶酶体膜相关蛋白LAMP1的定位,分析其荧光共定位情况,并应用GFP-RFP-LC3质粒表达观察自噬溶酶体的形成;(4)透射电镜观察自噬溶酶体的形成变化水平;(5)RT-q PCR和WB分别在分子水平和蛋白质水平观察Myosin1d对LAMP-1表达的影响;(6)利用溶酶体探针Lyso Sensor检测溶酶体活性的变化。结果:(1)在NRK细胞中,免疫荧光显微镜观察到Myosin1d与LC3明显共定位,免疫磁珠样品中Myosin1d富集明显,Apex透射电镜显示高密度颗粒的Myosin1d主要定位于自噬体结构;(2)饥饿处理2、4小时,WB结果显示,与对照组相比,Myosin1d敲除后,P62蛋白表达水平显著升高(P<0.01);(3)细胞饥饿处理4小时,免疫荧光显示,Myosin1d敲除后LC3和Lamp-1的共定位明显降低;瞬转GFP-RFP-LC3表达载体,与对照组相比,Myosin1d基因敲除后,自噬溶酶体的数目明显减少;(4)饥饿处理4小时,透射电镜结果显示,Myosin1d敲除的细胞中自噬溶酶体的数量明显减少;(5)与对照组相比,Myosin1d基因敲除细胞中,溶酶体Lamp1 m RNA的表达水平无明显差异性(P>0.05),WB结果显示,Myosin1d敲除后Lamp1蛋白的表达量与对照相比升高;(6)细胞饥饿处理2、4小时,溶酶体活性探针结果表明,Myosin1d基因敲除后,溶酶体活性较对照组有增强(P<0.05)。结论:Myosin1d参与并影响自噬溶酶体的生成过程,其作用机制可能是Myosin1d参与了自噬体的转运并影响其与溶酶体的融合。