论文部分内容阅读
目的：制备伊立替康长循环纳米脂质体,对制备方法进行筛选,并对伊立替康长循环脂质体的处方及制备工艺进行优化,确定最佳的制备方案。根据最佳制备方案制备样本,并对伊立替康长循环脂质体的各项质量标准进行考察研究。以结直肠癌细胞SW480,肝癌细胞HepG2,乳腺癌细胞MCF-7为细胞模型,考察游离伊立替康、空白长循环脂质体、伊立替康长循环脂质体对上述三种细胞的细胞毒性,并应用荧光染色法考察伊立替康长循环脂质体对MCF-7细胞形态的影响,为该纳米剂型应用于临床提供有效的试验数据。方法：(1)伊立替康长循环纳米脂质体的制备本实验考察了不同的制备方法对脂质体粒径和包封率的影响,确定了制备方法为乙醇注入-硫酸铵梯度主动载药法。然后通过单因素考察和正交试验设计确定最佳制备工艺。(2)伊立替康长循环纳米脂质体的质量控制与评价研究按照最佳处方制备伊立替康长循环纳米脂质体样本,分别考察脂质体的粒径、形态、电位、稳定性、体外释药等质量标准。(3)伊立替康长循环脂质体的体外抗癌活性研究选取结直肠癌细胞SW480,肝癌细胞HepG2,乳腺癌细胞MCF-7为细胞模型,通过MTT法检测伊立替康长循环脂质体对各种细胞的杀伤能力。采用荧光染色法,考察伊立替康长循环脂质体对人MCF-7细胞形态及凋亡的影响。结果：(1)伊立替康长循环纳米脂质体的制备选择乙醇注入-硫酸铵梯度主动载药法制备的伊立替康长循环脂质体粒径小且分布均匀,包封率高。确定的最佳处方为：磷脂300mg,使其浓度为10mg/mL,胆固醇100mg,55℃水浴通N2搅拌条件下逐滴加入到0.2mol/L的溶解了PEG400030mg,泊洛沙姆60mg的硫酸铵溶液中,硫酸铵水化介质与乙醇体积比为3：1,55℃水浴通N2条件下保温搅拌20min除去有机溶剂,得到空白长循环脂质体。将所得空白脂质体在生理盐水中透析12h,除去外水相中的硫酸铵,形成内外硫酸铵梯度,将伊立替康溶液(卵磷脂：伊立替康=10：1)加入空白脂质体中,55℃下孵育载药10min,即得伊立替康长循环纳米脂质体。(2)伊立替康长循环纳米脂质体的质量控制与评价研究根据最佳制备工艺制备的脂质体,粒径在110nm左右,形态成圆形、分布均匀、电位在-15mV左右,包封率达到92%,稳定性好,在体外缓慢释药,符合Weibull方程lnln[100/(100-Q)]=0.3845lnt-1.2134, R2=0.9747.(3)伊立替康长循环脂质体的体外抗癌活性研究与游离伊立替康溶液相比,伊立替康长循环脂质体对人直肠癌细胞SW480,肝癌细胞HepG2,乳腺癌细胞MCF-7有明显的抗肿瘤活性,并能够改变细胞的形态,促进细胞发生凋亡。结论：制备的伊立替康长循环脂质体保护了伊立替康的内酯环结构,延长了药物的作用时间,提高了药物的抗肿瘤活性。本实验可为制备脂质体提供一种新方法,并为伊立替康脂质体应用于临床提供有效的临床前实验数据,具有广阔的应用前景。