论文部分内容阅读
目的应用内质网应激（Endoplasmic reticulum stress，ERS）诱导剂2-脱氧葡萄糖（2-Deoxyglucose，2-DG）对癫痫持续状态（Statusepilepticus，SE）模型大鼠进行预适应，观察海马神经元的损伤状况和ERS相关分子GRP78、XBP-1的表达，旨在探讨ERS预适应对SE大鼠海马神经元的保护作用及可能机制。方法成年雄性健康Sprague-Dawley（SD）大鼠90只，随机均分成预适应组、SE组和正常组，再分为6个亚组，即SE前、SE后6小时（h）、12h、24h、2天（d）、7d，每亚组5只。预适应组以2-DG(150mg·kg-1)每天一次腹腔注射共7d。用氯化锂及匹罗卡品建立SE模型，记录SE的发生率和发作的潜伏期。甲苯胺蓝尼氏染色后观察SE后7d大鼠海马神经元的损伤情况并计数海马CA1、CA3、齿状回区存活神经元；免疫组织化学法检测ERS标志分子GRP78、XBP-1在海马CA1、CA3区的表达变化。结果1．SE组的SE成功率为100％，预适应组为88％，正常组没有发作的表现。同SE组相比预适应组的癫痫发生率降低，发作潜伏期延长（P＞0.05）。2．尼氏染色结果显示，SE后7d SE组和预适应组大鼠的海马各区神经元均有不同程度的损伤，以CA1区最显著。SE组海马各区的存活神经元数目都明显少于预适应组（p＜0.05）。正常对照组海马各区未见明显神经元损伤。3．免疫组化结果显示，SE组中GRP78、XBP-1的表达在SE后6h高于正常（P＜0.05），SE后12h和24h进一步增高（P＜0.05），SE后2d达峰（P＜0.05），SE后7d表达降至正常水平。预适应组中两蛋白的表达在SE前就高于正常水平（P＜0.05），在SE后6h和12h继续增高（P＜0.05），SE后24h和2d维持在高峰（P＜0.05），但XBP-1的灰度值在2d有所下降，SE后7d均降至正常水平。与SE组相比预适应组GRP78、XBP-1的表达在SE前、SE后6h、12h、24h四个时点都增强（P＜0.05），SE后2d XBP-1的灰度值低于SE组（P＜0.05），其余参数在2d和7d两个时点与SE组无明显差异（P＞0.05）。正常组的海马齿状回区也可见到GRP78、XBP-1的阳性表达，但强度均低于SE组和预适应组（P＜0.05），且各时点表达无明显差异。结论1．2-DG预处理成功诱导了ERS预适应。2．2-DG预处理能诱导癫痫耐受。3．ERS预适应对SE后海马神经元具有保护作用。4．XBP-1—GRP78途径活化可能是ERS预适应保护作用的重要机制。