【摘 要】
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帕金森病(Parkinsons disease,PD)是中枢神经系统常见的退行性疾病,其发病率仅次于阿尔茨海默病,位于第二位.本研究根据我们提出的基因治疗方案需要,在四环素调控系统的基础
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帕金森病(Parkinsons disease,PD)是中枢神经系统常见的退行性疾病,其发病率仅次于阿尔茨海默病,位于第二位.本研究根据我们提出的基因治疗方案需要,在四环素调控系统的基础上,构建了能通过四环素诱导调控治疗基因表达的通用型重组腺病毒伴随病毒载体质粒,分别将绿色荧光蛋白(enhance green fluorescence protein,EGFP)和人GDNF基因克隆到载体中,导入PC12多巴胺能神经细胞内,在培养液中加入四环素的类似物——强力霉素,观察其不同浓度对细胞内标记基因EGFP和hGDNF基因表达的影响,研究该载体对所携带基因表达的诱导调控作用;采用MPP<+>损伤PC12细胞的方法制作PD细胞模型,使用不同浓度的强力霉素对PC12细胞内hGDNF基因表达进行调控,观测PC12细胞的形态、相对存活率和相对活力,研究hGDNF基因对PD细胞模型的营养保护作用.结论:1.通用型四环素调控腺相关病毒载体质粒pSVbitTA能够携带EGFP基因在PC12细胞进行高效表达,并通过使用四环素类药物对转染到细胞内的外源基因表达进行有效调控.2.人GDNF基因能够通过AAV载体导入到PC12细胞内,随细胞分裂而进入子代细胞并能高效表达.3.强力霉素能够对导入到PC12细胞内的人GDNF基因表达进行调控.4.人GDNF基因对PC12细胞的形态及功能均无影响,但是能够保护细胞拮抗MPP<+>损伤.5.人GDNF基因保护PC12细胞免受MPP<+>损伤的作用强度可以通过使用强力霉素进行诱导调控.
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