鸭疫里氏杆菌病是由鸭疫里氏杆菌（Riemerella anatipestifer RA）引起的严重危害养鸭业的传染病。该菌有21个血清型，目前针对该病没有特效药物，主要依靠抗生素治疗，但RA易产生耐药性。黄连汤是由黄连、黄柏、甘草按一定比例配伍，经水提醇沉而制成的中药制剂，对人工感染和自然发病的鸭群均有很高的保护率，药物组方及制取方法已获国家发明专利授权（ZL201010550373.8）。我们前期研究发现，RA内毒素（lipopolysaccharide，LPS）是鸭疫里氏杆菌病的重要致病因子之一。为了研究黄连汤防治RA病的作用机制，本论文开展了鸭疫里氏杆菌LPS的提取、纯化及黄连汤在体内外对其影响的研究。以2型RA为实验对象，采用热酚水法结合乙醇纯化技术提取、纯化LPS，通过苯酚硫酸法、考马斯亮蓝法、琼脂糖凝胶电泳等技术，对所提取内毒素中多糖、蛋白质、核酸进行检测，并采用显色基质法测定其生物活性。结果表明，所获得LPS与RA菌体湿重比为1.36%，含糖1.48%、蛋白质2.08%，还有部分核酸片段，其生物活性为75.6EU/mg。相对我国内毒素标准品原料(E.coli0111)，所提取的LPS含糖和蛋白质较低，说明本实验所提取纯化的LPS纯度较高。将黄连、黄柏、甘草按照1:1:2比例配伍，采用水提醇沉和减压蒸馏方法，获得黄连汤有效部位药液1.63L，内含以上3种药物生药浓度为122.7g/L。以此药液为母药液，按实验需要稀释，配制成12.27g/L、30.9g/L、61.35g/L、92.03g/L、122.7g/L五种不同药物浓度的供试品药液。用上述五种不同浓度的药液200μL，在体外分别作用RA（3×109CFU/mL）、RA超声波破碎液（3×109CFU/mL）及提取的LPS（10mg/mL）各11h，用显色基质鲎试剂法检测各试验组LPS的浓度变化。结果显示，药物作用于RA时，随着药物浓度的增加，LPS浓度首先由1.15EU/mg升高到2.68EU/mg，然后下降到0.43EU/mg，即LPS浓度呈现先上升、后下降现象；药物对RA超声波破碎液和LPS作用时，随着药物浓度的增加，RA超声波破碎组LPS浓度从2.49EU/mg降为0.21EU/mg，LPS组2.89EU/mg下降到0.26EU/mg，呈现依次下降的趋势。这是因为：药物直接作用于RA时，先破坏菌体结构，导致RA外膜的LPS大量释放，低浓度的药物不足以清除大量的LPS，所以LPS浓度略有升高。随着药物浓度的增加，大量药物可消除多余的LPS，因此表现为LPS浓度先升高、后下降这一现象；药物对RA超声波破碎液组及LPS组处理时，不存在细菌破裂释放内毒素这一环节，其内含的内毒素量较为稳定，所以，随着药物浓度的增加，LPS浓度呈现下降趋势。实验表明：黄连汤在体外对LPS具有明显的消除作用。将雏鸭随机分为5组（编号为A、B、C、D、E)，其中A、B组分别用RA（0.5mL1×107CFU/mL/只）进行腹腔染毒， C、D组用LPS（10mg/只）腹腔攻毒，E组为空白对照组，腹腔注射生理盐水。B组、D组每只鸭每隔6h灌服30g/L黄连汤有效部位5mL，A、C、E组自由饮水。每隔6h测定各组鸭血浆LPS浓度。试验表明，随着给药次数的增加，B、D组临床和病理表现明显减轻，如病鸭缩颈减少、开始采食，器官充血减轻、纤维素炎典型病变消失；同时，B组鸭血浆LPS浓度由56.3EU/mg降为1.7EU/mg，D组由69.3EU/mg下降到2.3EU/mg；A组和C组临床症状相似，但A组较为严重，出现拉稀粪、结膜炎及神经症状，而C组体温明显升高，未发现结膜炎；E组无症状，正常进食饮水。实验证实了LPS是RA的重要致病因子，实验表明：黄连汤在体内也具有消除LPS的作用。总之，本论文研究表明：黄连汤在体内外对鸭疫里氏杆菌LPS均有较强的消除作用，黄连汤对RA的LPS的消除作用可能是黄连汤防治RA病的最重要原因之一。